在理论上,β-胡罗卜素几何图形同分异构体的评定还可以在其双重磁共振谱(NMR)上完成。但现阶段沒有参考文献报导。
β-胡罗卜素同分异构体的电子器件光谱图特不一样。顺式同分异构体的主消化吸收峰与反式同分异构体的主消化吸收峰对比,其电子器件光谱图产生“紫移”。与此同时,顺式同分异构体在342~348nm处会发生一个特点消化吸收峰。这种光谱仪特点可做为分辨β-胡罗卜素同分异构体的重要环节。
如上所述,因为分子结构在一个烃基处发生了顺式对映异构,在β-胡罗卜素的电子器件光谱图上342~348nm处会发生一个峰(消化吸收段)。这一峰被称作“顺式峰”(cis-peak)。分子结构中产生顺式对映异构的部位被称作“cis-band”。与此同时,与全反式同分异构体较为,顺式同分异构体主消化吸收峰的最高消化吸收光波长(λmax)也会出现轻微的“紫移”。图3中的I、Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ号峰的电子器件光谱图图在λmax=342~347nm上下与全反式同分异构体的光谱仪较为能够见到有显著的峰存有,详细图2;图3为顺式峰的绝对高度;与此同时,与Ⅳ号峰的光谱仪较为,I、Ⅱ、Ⅲ号峰光谱仪主消化吸收峰和顺式消化吸收峰的λmax;各自发生了5~6nm和1~4nm的“紫移”,见图4。这种光谱仪特点的转变带来了将I、Ⅱ、Ⅲ号峰评定为β-胡萝l、素顺式同分异构体的直接证据。
在C30-HPLC上,β-胡罗卜素的几何图形同分异构体能够得到较好的分离出来。因为对照品试品的贫乏,β-胡罗卜素顺式同分异构体的定量分析需根据其电子器件光谱图范畴内的吸光度指数。挥发光透射探测器(ELSD)的运用能够完成这一目地。在ELSD上搜集β-胡罗卜素全反式同分异构体数据信号的情况已由惠伯棣等创建进行。应用LC-PDA-ELSD串连系统软件,同歩搜集每一个β-胡罗卜素几何图形同分异构体成分的电子器件光谱图和品质数据信号,由二者峰总面积之比测算每一个成分的吸光度指数,最后达到在C30-HPLC-PDA系统软件上β-胡罗卜素各几何图形同分异构体的定量分析检验。最后依据其色谱仪峰总面积,能够精准精确测量出β-胡罗卜素几何图形同分异构体的构成。
一般状况下,用以定性分析的吸光度指数指的是在该有机化合物在λmax处的吸光度指数。β-胡罗卜素全反式同分异构体于450nm处的吸光度指数已被报导,如A1%1cm。一般在2500上下。
不容置疑,在PDA探测器上,一种β-胡罗卜素顺式同分异构体的量与其说在检验光波长处的色谱仪峰总面积呈正线性相关关联,合乎朗伯-梅尔斯基本定律。假如在ELSD探测器上,这类顺式同分异构体的量与其说峰总面积间亦存有正线性相关关联,则可重归其在PDA和ELSD顶峰总面积中间的线性相关关联,并估算其切线斜率。最后,按以下方式估计这类顺式同分异构体的吸光度指数。
AZ=AE(KZ/KE)
在其中:
AZ=顺式同分异构体吸光度指数;
AE=全反式同分异构体吸光度指数;
KZ=顺式同分异构体切线斜率=PDA峰总面积/ELSD峰总面积;
KE=全反式同分异构体切线斜率=PDA峰总面积/ELSD峰总面积;
依据朗伯-梅尔斯基本定律,按以下计算公式β-胡罗卜素同分异构体的成分。
x=(A×y)/(A1%1cm×100000)
在其中:
X=试品中常含的b,β-胡罗卜素同分异构体的量(克);
Y=试品溶剂的容积(mL);
A=试品中各成分的峰总面积(毫伏·秒),A1%1cm=吸光度指数,为在1公分光程长的色度杯里1%(w/v)浓度值物质的量浓度的基础理论消化吸收值,测算β-胡罗卜素全反式同分异构体成分时选用数值ε=2500(450nm)。