目地 创建黄蛭益肾胶襄HPLC指纹识别图普，选用指纹图谱并融合有机化学计算机视觉技术性对黄蛭益肾胶襄开展质量管理。方式 选用Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm)离子交换柱，以乙腈-0.05%硫酸铵溶液为流动性相，梯度方向过柱，容积总流量1.0 mL/min，柱温30℃，检验光波长210 nm。选用HPLC串连四极杆航行時间质谱分析（HPLC-Q-TOF-MS/MS）对一共有峰定性研究，选用聚类（HCA）、主成分分析法（PCA）及偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）数据分析。結果 16批试品中国共产党校准24个一共有峰，相似性点评均超过0.9，评定了在其中24个峰并属于7种药；HCA及PCA鉴别方法将试品分成3类；PLS-DA挑选出包含黄芩异黄烷苷、人参皂甙Rg1、毛蕊大豆异黄酮葡萄糖水苷、7,2'-二甲基-3',4'-二叔丁基异黄烷、松香醇二葡萄糖水苷、毛蕊大豆异黄酮、芒柄花黄素、绿原酸以内的8种关键差别成份。结果 创建的HPLC指纹图谱可较大水平体现黄蛭益肾胶襄的药味构成信息内容，较全方位体现其品质，运用的点评剖析技术性可有效点评其品质差别并精确找寻出差别成份，为其品质有效调节和规范健全带来根据。

黄蛭益肾胶襄由黄芩、水蛭、枸杞、川牛膝、盐车前子、淮山药、薏米仁、沙参、墨旱莲、菟丝子、三七、益母草颗粒、北沙参、蝉蜕、紫河车15味中药材构成，依据知名肾炎学者邹云翔专家教授独创性的经历方特制而成，作用补气血滋阴、健脾胃益肾、化淤利湿，用以轻、轻中度漫性继发性通用型慢性肾炎的气阴两虚或兼具气滞血瘀，水液证者。黄蛭益肾胶襄药味诸多，特性各不相同，成分繁杂，该中药制剂现阶段的分析关键在医学运用层面，欠缺对其质量管理层面的科学研究。现行标准产品质量标准內容简易，质量管理不全方位，方式也比较落伍，定量分析指标值单一，不可以表现黄蛭益肾胶襄的总体有机化学构成，无法对药物开展全方位的质量管理，那样必然危害临床用药的实效性。

中药材指纹图谱的特性包含全面性、特征及可细化等层面，突显中药材的详细外貌，在科学研究中药材相关成分、操纵中药材品质及其辨别层面的功能更加突显。有机化学计算机视觉技术性可将指纹图谱信息内容功效系数法，客观性体现中药材品质信息内容，包含聚类（HCA）、主成分分析法（PCA）、判别分析（DA）和神经网络技术性（ANN）等，是一种合理点评中药材品质的方式 。中药材指纹图谱融合有机化学计算机视觉，是中药材真假辨别、品质评估的强有力方式，早已普遍使用于中草药及中药制剂的质量管理层面。本科学研究初次选用HPLC创建黄蛭益肾胶襄的指纹图谱，运用HPLC-Q-TOF-MS/MS对其一共有成份开展定性研究，并融合HCA、PCA、和PLS-DA对其实现品质评估并发觉导致不一样批号间品质不同的要素，为黄蛭益肾胶襄质量管理和健全产品质量标准打下基础。

1 原材料

高效率液相色谱Ulti Mate3000（英国赛默飞世尔高新科技有限责任公司）；Agilent 1290高效率液相色谱（英国安捷伦公司）；Bruker四级杆航行時间质谱仪器（法国布鲁克企业）；XSE105型电子分析天平（法国梅特勒-托利多企业）；Thermo Heraeus Multifuge X3离心脱水机（英国赛默飞世尔高新科技有限责任公司）；KUDOS超声波清洗器（上海市科导超声波仪器设备有限责任公司）；Milli-Q®型超纯水仪（英国密理博企业）。

标准品：松香醇二葡萄糖水苷（生产批号111537-20160501，质量浓度≥91.7%），购自我国食品药品安全检验研究所；7,2'-二甲基-3',4'-二叔丁基异黄烷（生产批号Y28M10H84303，质量浓度≥98%）、黄芩异黄烷苷（生产批号Y08S8H43409，质量浓度≥98%）、美迪紫檀木苷（生产批号P21N9F75533，质量浓度≥98%）、毛蕊大豆异黄酮葡萄糖水苷（生产批号Y27F9H54731，质量浓度≥98%）、芒柄花苷（生产批号R28O8F46957，质量浓度≥98%）、毛蕊大豆异黄酮（生产批号Y24N9Y75652，质量浓度≥98%），均购自上海源叶生物技术有限责任公司；芒柄花黄素（生产批号MUST-18033005，质量浓度≥99.03%），购自成都市曼斯特生物技术有限责任公司。工业甲醇、乙腈、苯甲酸为色谱纯；硫酸铵为分析纯；水为超纯水系统。

黄蛭益肾胶襄16批试品、药方中每种药的原中药材（经苏州药物产品质量检测研究所闵春艳负责人中药师评定达标）、缺单种药的黄蛭益肾胶襄呈阴性试品均由苏州雷允上医药有限责任公司给予。16批试品序号S1～S16，相对应生产批号各自为OC26002、PC26002、QC26001、RC26003、RC26004、RC26005、RC26006、RC26007、RC26008、RC26009、RC26010、RC26011、SC26001、SC26005、SC26006、SC26007。

2 方式

2.1 色谱仪标准

以Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm）为离子交换柱；流动性相为乙腈（A)-0.05%硫酸铵水（B）；梯度方向过柱程序流程：0～5 min、5%A,5～85 min、5%～45%A；容积总流量1.0 mL/min；柱温30℃；气相容积10μL；检验光波长210 nm。

2.2 质谱分析标准

选用电喷雾器离子源（ESI），正、空气负离子逐行扫描，扫描仪范畴m/z 50～1 500，干躁气溫度180℃，空气干燥器容积总流量6 L/min，电子烟雾化器工作压力150 k Pa，毛细血管工作电压4.5 k V，裂化工作电压500 V，撞击动能35.0 e V。

2.3 水溶液的制取

2.3.1 供试品水溶液的制取

高精密称取本产品粉末状约2 g，置具塞锥形瓶中，加工业甲醇20 m L，超声波解决（输出功率100 W，頻率52 k Hz)30 min，取下，放冷，上清液过0.45μm的滤纸，取续渗沥液，即得。

2.3.2 标准品水溶液的制取

取松香醇二葡萄糖水苷、7,2'-二甲基-3',4'-二叔丁基异黄烷、黄芩异黄烷苷、美迪紫檀木苷、毛蕊大豆异黄酮葡萄糖水苷、芒柄花苷、毛蕊大豆异黄酮、芒柄花黄素适当，高精密称取，加工业甲醇做成浓度值分別为18.00、8.40、21.20、8.40、20.08、15.94、29.28、16.92 mg/L的混和标准品水溶液。

2.3.3 中药材水溶液的制取

取黄芩、水蛭、枸杞、川牛膝、盐车前子、淮山药、薏米仁、沙参、墨旱莲、菟丝子、三七、益母草颗粒、北沙参、蝉蜕、紫河车各2 g，同“2.3.1”项下方式制取签单种药供试品水溶液。

2.3.4 缺单种药的呈阴性试品溶剂的制取

各自取缺单味药的呈阴性试品2 g，同“2.3.1”项下方式制作成呈阴性试品水溶液。

2.4 方法学调查

2.4.1 精度实验

按“2.3.1”项下边法纪得供样品水溶液（S1），按“2.1”项下色谱仪标准，持续气相6次测量。以16号峰毛蕊大豆异黄酮为参考峰，测算各一共有峰的相对性保存期和相对性峰总面积RSD<0.38%、3.97%，说明仪器设备精度优良。

2.4.2 可重复性实验

按“2.3.1”项下边法纪得供样品水溶液（S1)6份，按“2.1”项下色谱仪标准气相测量。以16号峰毛蕊大豆异黄酮为参考峰，测算各一共有峰的相对性保存期和相对性峰总面积RSD<0.24%、4.35%，说明方式可重复性优良。

2.4.3 可靠性实验

按“2.3.1”项下边法纪得供样品水溶液（S1），按“2.1”项下色谱仪标准，各自在0、3、6、12、18、24 h气相测量。以毛蕊大豆异黄酮为参考峰，测算各一共有峰的相对性保存期和相对性峰总面积RSD<0.24%、4.57%，说明试品在24 h内平稳。

2.4.4 耐用度实验

取同一批试品水溶液（S1），各自选择同一离子交换柱Waters XBridge®Shield RP18(250 mm×4.6 mm,5μm）的不一样生产批号气相，生产批号各自为0135383132、0136392001、0137392827，按“2.1”项下色谱仪标准气相测量。以毛蕊大豆异黄酮为参考峰，测算各一共有峰的相对性保存期和相对性峰总面积RSD<0.39%、6.94%。