索马甜(也译者嗦吗甜、莎马甜，Thaumatin)又被称为猕猴桃甜蛋白质，是以纯植物Thaurnatococcusdaniellii中获取出的巨甜蛋白，与其它绿色植物來源的具备清甜味或能引起清甜味的蛋白如莫内林(Monellin)、仙茅蛋白质(蒂姆库克灵，Curculin)161、马槟榔蛋白质(马槟灵，Mabinlin)、神秘果素(Miraculin)、培它丁(Pentadin)191、布拉齐因(Brazzein)等一起被称作甜蛋白质。相对性于传统式的糖类与碳水化合物糖原或有机合成甜味素，这种纯天然甜蛋白质一般具备糖度高、发热量低、口感好、安全性无害等优势，与此同时，还具备改进食物口味、生物降解为身体需要的多种碳水化合物及其不容易造成血糖升高、龋齿等特性，被觉得十分具备发展潜力的食用添加剂。研究表明，索马甜是由一个多基因家族编号、具备类似特性的蛋白质，不一样种类索马甜蛋白质均由一条多肽链构成，带有20七个碳水化合物，但仅有五个或更少的碳水化合物差别，相对分子质量约为22kD，等电点处于11.5～12.5中间，现阶段已看到的包含ThaumatinI、ThaumatinII、Thaumatina、Thaumatinb、ThaumatinC等，在其中ThaumatinI和ThaumatinII是最首要的成份。索马甜的糖度约是等品质绵白糖的3000倍，除此之外，还有着提高芬芳和改进口味功效，与糖原等甜味素同用有协同作用。索马甜造成清甜味的原理与其说构造中的Lys残基、羧基及其Asp-21和Phe-80产生的类天冬苯丙二肽酯结构域等有密切相关。

现阶段，索马甜做为甜味素、增味剂，在西方国家和日本具备一定的运用经营规模，中国应用相对性较少，依据中国现阶段的《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》(GB2760-2014)，索马甜能够做为甜味素在冷藏健康饮品(服用冰以外)、生产加工干果与籽类、烘焙食品食品类、饭桌清甜味料、饮料类(包裝生活用水以外)食品类中限定应用，其最高容许需求量均为0.025g／kg。可是，因为索马甜的生产量受限于資源、地区及其产业化生产制造标准，限定了其在食品工业中的应用，世界各国已经有许多运用基因工程技术技术性对其遗传基因开展复制、根据基因表达的分析报导。

殊不知，中国未有对于索马甜的检查办法规范，对其检查办法的消息也很少，仅厚为光伟等运用高效率液相色谱仪一挥发光探测器对于包含索马甜以内的甜味素检验办法的科学研究。文中初次根据色谱分析和电泳原理法创建饮品中索马甜的剖析测试标准，在其中常用色谱分析以DAD为探测器相较通用性探测器具备可选择性，能够发挥一定的判定功效，除此之外，根据SDS-PAGE进一步证实，针对比较繁杂的食品类栽培基质，可以得到更加稳定的結果。

一、仪器设备、实验试剂与方式

1、仪器设备与实验试剂

实验仪器：超高效率液相色谱(1290)：英国Agilent企业；紫外线由此可见光度计(Lambda35)：英国PerkinElmer企业；快速冷冻离心机(BiofugeStratos)：英国ThermoFisherScientific公司；Milli—Q超纯水系统设备：法国的Millipore公司；电子分析天平(AL204／01)：METTLERTOLEDO企业；蛋白电泳系统软件Mini-PROTEINTetra：英国Bio-rad公司；超声波清洗器(KQ5200DE)：昆山市超声波仪器设备有限责任公司；超滤膜管(15mL，10KD)：法国的Millipom企业；0.45μm水体微孔滤膜购自上海安谱企业。

标准物质与实验试剂：索马甜(纯净度97.8％)购自日本TOKYOCHEMICALINDUSTRY企业；蛋白质标准品(MidRange)：BBI生物科学有限责任公司；5X蛋白质上样缓冲溶液、甘氨酸、过硫酸铵、正丁酸、N’，N’一甲叉正丁酸、十二甲基硝酸钠、N，N，N’，N’-四羟基乙二胺、溴酚蓝、考萨雷亮蓝、三氟乙酸：生工生物工程项目(上海市)有限责任公司企业；工业甲醇、酒精、甲酸均为分析纯：国药控股化学药品有限责任公司；色谱纯乙腈：默克化工技术性(上海市)有限责任公司；实验常用不一样类型饮品商品购于本地商场。

2、方式

（1）试品解决

饮品混匀(在其中炭酸类饮品提早超声波5min去除二氧化碳)，取2.5mL移进到25mL容量瓶中，自来水滴定剂，在4℃下为8000r／min的转速比离心式10min，取上清液15mL到超滤膜管内开展超滤膜解决，轻轻地清洗滤纸，截流液滴定剂至3mL，开展色谱前要0.45μm滤头过虑。

（2）紫外线可见光谱扫描仪

以水为空白试验，对索马甜溶液开展全光波长扫描仪。扫描仪速率：120nm／min，屏幕分辨率：0.1nm，间隙总宽：0.5nm，扫描仪范畴：700～190nm。

（3）液相色谱仪标准

离子交换柱：300SB-C18，RRHD1.8μm，100mm×2.1mm(i，d)；流动性相：乙腈、0.1％三氟乙酸溶液；流动速度：O.3mL／min；进样量：20μL；柱温：25℃。梯度方向过柱：0～3min，乙腈10％～0.1％三氟乙酸溶液90％；3～15min，乙腈(10％～100％)，0.1％三氟乙酸溶液(90％～0％)；15.1～20min，乙腈(100％)；20.1～25min，乙腈10％～0.1％三氟乙酸溶液90％。探测器：DAD，检验光波长278.2nm，与此同时开展190～400nm光波长扫描仪。

(4)标曲的制做

将索马甜各自自来水稀释液到浓度值为10mg／L、25mg／L、50mg／L、100mg／L、200mg／L、500mg／L系列产品标液，开展深入分析测量，以色谱仪峰总面积与相对应浓度值制作标曲线性回归方程。

(5)方法检出限和定量限

将没有索马甜的饮品稀释液10倍，添加索马甜标液，使其浓度值在10mg／L，饮品混匀(在其中炭酸类饮品提早超声波5min去除二氧化碳)，取2.5mL移进到25mL容量瓶中，自来水滴定剂，在4℃下为8000r／min的转速比离心式10min，取上清液15mL到超滤膜管内开展超滤膜解决，轻轻地清洗滤纸，截流液滴定剂至3mL，开展色谱前要0.45pm滤头过虑。反复测量20次，以結果相对标准偏差的3倍测算出方式的方法检出限，以結果相对标准偏差的10倍测算出定量限。

(6)利用率和精度

各自向不一样种类饮品试品中加上25mg／L、50mg／L、200mg／L不一样含量的索马甜，每一个加标试品依照所确立的方式反复测量6次，测算利用率和精度。

(7)SDS—PAGE剖析

分离出来胶浓度值12.0％，电泳原理试品用5X蛋白质上样缓冲溶液开水解决5min，上样量60μL，电泳原理标准135V、50min，考马斯亮蓝上色。

二、結果

1、超高效液相色谱色谱分析剖析索马甜方式的创建

（1）紫外线可见光谱扫描结果

运用紫外线由此可见分光仪光谱分析仪对索马甜水溶液在700～190nm范畴内开展扫描仪，結果如图所示1所显示。

由图1能够看得出，索马甜具备蛋白类物质典型性的紫外线可见光谱，因为蛋白质的功能中脂环氨墓酸谷氨酸、色氨酸、苯丙氨酸的存有，促使其在280nm附近有特点消化吸收峰，在这里地区较大消化吸收光波长为278.2nm。尽管在200nm附近有更强的消化吸收，但鉴于大部分化学物质在这里地区有消化吸收，为防止影响，采用278.2nm做为事后剖析的根据。

（2）色谱仪标准及试品解决标准的明确

考虑到索马甜蛋白相对分子质量超出20000kD，具备很大的规格，故采用合适蛋白剖析的大直径离子交换柱，本探讨选用300SB—C18，RRHD1.8μm。根据对常见的工业甲醇、乙腈等流动性相开展提升，最后建立了以0.1％三氟乙酸、乙腈做为索马甜高效液相剖析的流动性相。