应用UPLC-DAD-BCD方式对吴茱萸、钩藤、玄参和山豆根(苗)提取液中的BChE缓聚剂开展挑选結果见图3。吴茱萸中有4个峰在405 nm检测中表明倒峰,说明具备BChE抑止活力。钩藤中有3个倒峰、玄参中有五个倒峰、山豆根(苗)中有两个倒峰。在其中吴茱萸中的11号峰表明极强的BChE抑止活力。线上统计分析方法因为是流通性的反映检验,更能迅速发觉活力较强、酶抑止速度更快的成份。
为了更好地确立吴茱萸、钩藤、玄参和山豆根(苗)提取液中的活力成份,选用UHPLC-LTQ/Orbitrap MS方式各自对4种中药材中发生倒峰的成份开展评定。依据各峰保存期、质谱分析信息内容等与论文参考文献相较为,数据显示峰1,2,3,4,6,7,8,9各自为去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、1-羟基-2–4(1H)-喹诺酮、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱、苦参碱和氧化苦参碱,在其中峰5,10,11和12尚需进一步科学研究多方面辨别。活力成份评定結果见表1。
化学物质1:来自吴茱萸,保存期42.56 min,共价键方式,其准分子离子为m/z302.1281 ,二级质谱分析表明其关键残片m/z 287.105 4 和286.0984 ,融合参考文献基本推断化学物质1为去氢吴茱萸碱。
化学物质2:来自吴茱萸,保存期72.87 min,正正离子方式,其准分子离子为m/z304.144 3 ,二级质谱分析表明其残片m/z286.096 9 ,m/z171.091 8为标准分子离子破裂B环 ,m/z161.071 1准分子离子破裂C环 ,m/z144.080 8和134.060 0分别为 和 ,融合参考文献基本推断化学物质2为吴茱萸碱。
化学物质3:来自吴茱萸,保存期75.13 min,共价键方式,其准分子离子为m/z288.112 9 ,二级质谱分析表明其关键残片m/z273.102 2 ,m/z244.086 9为标准分子离子脱下C2H4O,m/z145.039 6为C环破裂脱下C10H8N·,融合参考文献基本推断化学物质3为吴茱萸次碱。
化学物质4:来自吴茱萸,保存期81.60 min,共价键方式,其准分子离子为m/z366.2783 ,二级质谱分析表明其关键残片m/z352.891 6 ,322.490 2为 ,186.091 9为 ,融合参考文献基本推断化学物质4为1-羟基-2–4(1H)-喹诺酮。
化学物质6:来自钩藤,保存期68.88 min,共价键方式,其准分子离子为m/z367.201 4 ,二级质谱分析表明其关键残片m/z335.175 9,298.143 6,224.128 0和144.080 7,各自为标准分子离子遗失CH3OH、C4H7N、C10H9N和C12H17NO3的残片,融合参考文献基本推断化学物质6为去氢毛钩藤碱。
化学物质7:来自钩藤,保存期72.93 min,共价键方式,其准分子离子为m/z369.2165 ,二级质谱分析表明其关键残片m/z337.190 6,298.143 9,226.143 6和144.080 7,各自为标准分子离子遗失CH3OH、C4H9N、C10H9N和C12H19NO3的残片,融合参考文献基本推断化学物质7为毛钩藤碱。
化学物质8:来自玄参和山豆根(苗),保存期8.04 min,共价键方式,其准分子离子为m/z249.195 7 ,二级质谱分析表明其关键残片m/z231.185 5 ,融合参考文献基本推断化学物质8为苦参碱。
化学物质9:来自玄参和山豆根(苗),保存期14.12 min,共价键方式,其准分子离子为m/z265.190 5 ,二级质谱分析表明其关键残片m/z247.190 8 ,m/z205.138 3 ,m/z 148.112 5 融合参考文献基本推断化学物质9为氧化苦参碱。
本科学研究创建了一种UPLC-DAD-BCD线上统计分析方法,用以迅速挑选吴茱萸、钩藤、玄参和山豆根(苗)4种药材中的BChE缓聚剂,发觉12个成份具备BChE抑止活力,根据UHPLC-LTQ/Orbitrap方式评定出8种活力成份,如:去氢吴茱萸碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、1-羟基-2–4(1H)-喹诺酮、去氢毛钩藤碱、毛钩藤碱、苦参碱和氧化苦参碱。研究表明,创建的仪器设备联用系统软件平稳、线上统计分析方法灵巧,可以普遍用以中药材繁杂机质中微生物效用成份的迅速筛选。
中药材成份繁杂多种多样,传统式绿色植物有机化学分离纯化活力化学成分的方式 ,存有資源耗费,很多的财力物力资金投入到分离出来已经知道的和没有意义的化学物质科学研究,本研究思路选用高效率色谱仪分离出来、流动性注入在线反应、细胞生物学即时检验于一体的线上剖析技术性,迅速点评单一成份微生物效用,只需小量的试品就可以达到活力化学成分的挑选和评定,为中药材繁杂栽培基质中澳的生物活性成分的迅速发觉,给予了一种高效率、方便快捷的研究对策。
本科学研究创建的线上UPLC-DAD-BCD方式可以用以迅速筛选别的酶或蛋白激酶微生物效用成份,根据对中药材繁杂成份的不一样靶标活力剖析,为诠释中药材及棘籽药力化学物质的多靶标协同效应体制及搭配规律性方剂基本原理给予一种合理的研究思路和方式方法。