五味子属木兰科绿色植物，其关键带有核甘酸、木脂素类、三萜类、黄酮类化合物、多糖类及其桂皮醛等化学物质。具备益气养阴津、收敛性固涩、补肾壮阳宁心等功效。除此之外，五味子主要成分有维护神经中枢系统软件、抑菌、抗氧化应激、抗癌、延缓衰老等功效。

含糖量是由单糖根据糖苷键汇聚生成的分子伴侣，普遍出现于绿色植物、小动物、微生物菌种和水藻等，具备抗氧化性、抗癌、激素调节、抗感染等多种多样药理学活力；含糖量传统式的获取方式是热逆流获取，存有耗能高、时间长、高效率劣等不够；当代获取加工工艺有超声波获取、微波加热获取、酶解获取等；获取技术的探讨是含糖量科学研究的基本，它不但危害获取的高效率，并且会危害含糖量的活力。

选用匀质酶解获取法获取五味子含糖量，与传统式萃取法、流回等方式对比，匀质获取法具备获取时间较短、高效率、实际操作简单、等优势，本试验初次选用匀质酶打法获取五味子含糖量，在单要素的根基上，选用响应面法提升含糖量获取加工工艺，为植物多糖的制造带来了一种高效率、绿色环保的方式 ，为五味子含糖量在药业、营养食品等方面的运用带来了理论基础。

一、原材料与方式

1、仪器设备与原材料

MH2000电子器件控温电加热器套（北京市化玻医疗机械有限责任公司），T10BS2五分散机（法国IKA企业），FA16004N电子器件电子分析天平（上海市箐海仪器设备有限责任公司），MULTIFUZESER离心机（ThermoFisher企业），RV10DS25旋转蒸发器（法国IKA企业），1601紫外线光度计（北京北分瑞利分析仪企业），FD-1E-50冷冻式干燥机（北京市博医实验室仪器有限责任公司），DC-1000A快速多用途破碎机（浙江武义鼎藏日用金属制造厂），SU8000透射电镜（日本日立）；五味子购于长春农贸批发市场，果胶酶（500u/mg，上海市腾越生物科技有限责任公司），别的实验试剂均为分析纯。

2、实验方法

（1）五味子含糖量的匀质酶解获取

将干躁后的五味子破碎，先后用乙醚、90%的酒精流回，去除黑色素、脂类类化合物及其低聚木糖和小分子水化学物质，挥发有机溶剂，获得预备处理试品。精确称量预备处理后的五味子3.0g，用液料比为25mL/g的果胶酶溶液泡浸12h，在选择的标准下获取，随后以转速比为3500r/min离心式15min，上清液缓解压力浓缩至一定容积，用95%酒精在4℃标准下醇沉12h，沉积低温干燥获得粗多糖。获取后的沉渣晾晒，用透射电镜观查其机构毁坏水平。

（2）五味子含糖量的热逆流获取

取一定量的预备处理试品，依照100mL/g有机溶剂原材料比进入纯净水，泡浸12h，在96℃气温下流回获取4h，将干躁后的五味子破碎，先后用乙醚、90%的酒精流回，去除黑色素、脂类类化合物及其低聚木糖和小分子水化学物质，挥发有机溶剂，获得预备处理试品。精确称量预备处理后的五味子3.0g，用液料比为25mL/g的果胶酶溶液泡浸12h，在选择的标准下获取，随后以转速比为3500r/min离心式15min，上清液缓解压力浓缩至一定容积，用95%酒精在4℃标准下醇沉12h，沉积低温干燥获得粗多糖。获取后的沉渣晾晒，用透射电镜观查其机构毁坏水平。获得流回获取粗多糖。获取后沉渣晾晒，用透射电镜观查。

（3）葡萄糖水标曲的制作

精确称量葡萄糖水标准物质加纯净水融解、滴定剂，配置成浓度值0.1g/mL的葡萄糖水标液。

高精密汲取葡萄糖水规范液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，各自放置25mL具塞试管婴儿中，放水至2.0mL，添加1.0mL5%甲酸水溶液，最终加5.0mL硫酸，静放5min，随后在40℃水浴中加温30min，以实验试剂空缺水溶液为对照品，在490nm光波长处测量OD值（Abs），用Abs对浓度值C（mg/mL）重归，制取标曲C=8.4939×Abs 0.152，在其中R²=0.999，标曲如下所示如图所示1。

计算方法如下所示：

含糖量得率（%）=（V×C×F×W₂/W₃×W₁）×100；

式中：C-由线性回归方程测算得到的含糖量的浓度值（g/L），V-融解W₃滴定剂后容积（L），F-计算因素；W₁-原状品质，W₂-由W₁获取的粗多糖的品质（g），W₃-从W₂中称量用以剖析测量的粗多糖的品质。

（4）单要素实验

固定不动别的标准，各自以加酶量（0.01、0.02、0.04、0.05g）、获取時间（1、2、3、4、5min）、获取溫度（35、45、55、65、75℃）和匀质转速比（8000、11500、14500、17500、20500r/min）做为自变量，考察各要素对含糖量提获得率的危害。

(5)BBD实验和数据统计分析

选择获取溫度、获取時间和匀质转速比三个要素为变量，每一个要素选择三个水准（表1），以含糖量提获得率（Y%）为响应值，选用BBD试验方案（表1）、响应面提升获取加工工艺主要参数。运用Design-Expert8.0手机软件开展统计数据数据分析。

二、結果与探讨

1、单要素试验

（1）获取時间对含糖量提获得率的危害

精确称量预备处理试品3.0g，以液料比25mL/g的1%果胶酶液泡浸6h，获取溫度45℃，匀质转速比14500r/min时，各自调查获取時间1、2、3、4、5min对提获得率的危害，結果见图2（a）。由图2（a）得知，在1～2min内含糖量提获得率随時间的提升迅速提升，2min时含糖量提获得率做到最大值，以后随時间的提高而减少。在1～2min时间段内随時间的提升，细胞组织的粉碎水平提升，胞内含糖量的融解、蔓延的效果提升 ，获取
得率迅速提升，且快速的裁切功能下，含糖量的融解和蔓延均可在较短的時间内实现均衡，因而相对性热逆流获取，匀质酶解获取必须的時间十分短；2min后，可能是含糖量的糖苷键及果胶酶的构造在明显的裁切功能下被毁坏，造成 含糖量提获得率降低。因而，获取的最佳时间范畴是1～3min。

（2）获取溫度对含糖量提获得率的危害

精确称量3.0g预备处理试品，以液料比25mL/g的1%的果胶酶液泡浸6h，获取時间2min，匀质转速比14500r/min，各自调查溫度35、45、55、65、75℃对提获得率的危害，結果见图2（b）。由图2（b）得知，在35～45℃温度范围内含糖量提获得率随溫度提升快速提升，在45℃时提获得率超过最高值，以后随溫度提升迅速减少。剖析很有可能的因素是在一定温度范围内，随环境温度的上升酶促反应提升、含糖量在水中的溶解性扩大，含糖量的融解和传播速度提升，提获得率迅速提升。而当溫度提升超出一定区域内，随环境温度的提升，酶的活性减少，含糖量的构造也很有可能随溫度提高而产生变化，导致提获得率降低。因而，选作45℃为单要素的最好溫度。

（3）匀质转速比对含糖量提获得率的危害

精确称量3.0g预备处理试品，用液料比25mL/g的1%的果胶酶液泡浸6h，获取溫度45℃，获取時间2min时，调查匀质转速比各自为8000、11500、14500、17500、20500r/min时对提获得率的危害，結果见图2（c）。由图2（c）能够发觉，匀质转速比在8000～14500r/min范畴内，含糖量提获得率随匀质转速比数的提高而提升，当匀质转速比为14500r/min时获取率较大，以后含糖量提获得率随转速比的提升迟缓降低。这可能是匀质转速比数提升，对固态原材料机构的粉碎水平提升，企业产品质量的固态机构的比表面提升，有机溶剂与试品的了解更充足，含糖量由机构內部向周边有机溶剂的传播速度加速，含糖量的提获得率提升；匀质转速比数比较大时，含糖量及其酶的构造很有可能被毁坏，导致含糖量提获得率发生迟缓减少。因而，最好的匀质转速比为14500r/min。

（4）果胶酶使用量对五味子含糖量提获得率的危害

精确称量3.0g五味子，用液料比为25mL/g的不一样含量的果胶酶液泡浸6h，在获取溫度45℃，获取的时间为2min，匀质转速比14500r/min，各自调查果胶酶使用量0.010、0.020、0.030、0.040、0.050g对五味子含糖量提获得率的危害，結果见图2（d）。由图2（d）得知，在0.01～0.04g加酶量范畴内，含糖量提获得率随果胶酶添加量的提升提获得率由5.6%迟缓提升到6.6%，这可能是因为果胶酶量提升，酶解实际效果提升，提获得率提升；在加酶量为0.04g（1.33%）时，含糖量提获得率超过最大，以后随果胶酶量的提高而降低。加酶量太多时，很有可能会使含糖量在果胶酶和明显的裁切功能下，含糖量被溶解，使提获得率减少。但相比别的3个影响因素，加酶量对含糖量得率危害相比较小，但加酶量对获取成本费的干扰很大。因而果胶酶的最好加酶量为1.33%，且不会再进一步提升。