阿尔泰金银花（Trolliusaltaicus），为毛茛科金银花属多年生长 木本植物，关键发育于在我国新疆阿勒泰、塔城地区，性微寒，具备清热去火、消肿除菌、止血方法止咳化痰等作用，其干躁花骨朵临床医学上多用以上呼吸道感染、急慢性咽炎和扁桃体发炎等症状的医治，本地民俗也将其泡茶食用以预防流感等病症。殊不知，做为产品金银花的来源于中药材之一，该中药材的分析报导较少。荭草素半乳糖苷等黄酮类碳苷类物质是该中药材充分发挥药力的关键活力成份，并进一步讨论了其黄酮类物质的流回获取加工工艺。超声波輔助获取是使用超声的剧烈的震动、空蚀、拌和等效用毁坏植物细胞壁，推动相关成分溶解获取有机溶剂中。酶輔助超声波获取法融合了酶法和超声波获取法的优势，不但获取时间较短、获取高效率，且能比较好地维持提取液的特点和质量，已经被普遍使用于中草药材活力化学成分的获取当中。文中拟深入探讨酶制剂的类型、酶加上量、pH、料液比、获取時间、获取溫度及其获取输出功率对其所含黄酮类获取率的危害，进一步融合Box-Behnken实验方案设计和响应面分析，提升阿尔泰金银花黄酮类物质的最好酶輔助超声波获取加工工艺，为阿尔泰金银花以及黄酮类物质的深度开发给予参照数据信息。

一、原材料与方式

1、原材料与实验试剂

阿尔泰金银花中药材于2016年8月收集于新疆阿勒泰地区，经新疆省药物研究所何江副研究员评定为阿尔泰金银花T.altaicus的干躁花骨朵，中药材破碎，过40目筛。荭草素2-O-β-L-半乳糖苷标准品（OGA，上海源叶生物技术有限责任公司，质量浓度98.0%，P31O7F23952）；纤维素酶:（4×10⁵U/g）、半纤维素酶（1×10⁵U/g）果胶酶（3×10⁵U/g）和中性蛋白酶（5×10⁵U/g）各自购自上海市如吉生物技术發展有限责任公司；别的实验试剂均为国内分析纯。

2、仪器设备与机器设备

AS系列产品超声波清洗机：天津市欧特赛恩斯仪器设备有限责任公司；DZKW-S-4电加热恒温水浴锅：北京永光辉医疗设备有限责任公司；AL204型电子分析天平：梅特勒-托利多仪器设备有限责任公司，751型紫外线由此可见光度计：上海市菁华高新科技仪器设备有限责任公司。

3、实验方法

（1）标准品溶液的配制及标曲制作

高精密称量干躁至恒重的OGA标准品5.0mg于25mL容量瓶中，用70%酒精融解、稀释液至标尺，混匀、静放，得0.20mg/mL的0GA标准品水溶液，储存预留。各自高精密汲取标准品水溶液0mL、l.0mL、2.0mL、3.0mL、5.0mL、7.0mL各自放置25mL容量瓶中，各放水至8.0mL，加5%亚硝酸钠水溶液1.0mL，搅拌，置放6min后，加10%硝酸铝水溶液1.0mL，搅拌置放6min后；加上4%氢氧化钠溶液标准溶液10.0mL，放水至标尺，混匀置放15min，以相对应实验试剂为空缺，在500nm处测量OD值（A），以A为纵轴，浓度值（C）为横轴制作标曲，得线性回归方程Y=0.523X-0.0109，R₂=0.9994，在0.008mg/mL～0.056mg/mL范畴内有优良的线性相关关联。

（2）试品水溶液制取以及黄酮类物质测量

称量一定量阿尔泰金银花，再各自向在其中加上不一样容积不一样含量的酒精，添加酶，在一定溫度下各自超声波解决一定時间，制取供试试品水溶液。高精密称量干躁至恒重的OGA标准品5.0mg于25mL容量瓶中，用70%酒精融解、稀释液至标尺，混匀、静放，得0.20mg/mL的0GA标准品水溶液，储存预留。各自高精密汲取标准品水溶液0mL、l.0mL、2.0mL、3.0mL、5.0mL、7.0mL各自放置25mL容量瓶中，各放水至8.0mL，加5%亚硝酸钠水溶液1.0mL，搅拌，置放6min后，加10%硝酸铝水溶液1.0mL，搅拌置放6min后；加上4%氢氧化钠溶液标准溶液10.0mL，放水至标尺，混匀置放15min，以相对应实验试剂为空缺，在500nm处测量OD值（A），以A为纵轴，浓度值（C）为横轴制作标曲，得线性回归方程Y=0.523X-0.0109，R₂=0.9994，在0.008mg/mL～0.056mg/mL范畴内有优良的线性相关关联。并测算获取率。阿尔泰金银花黄酮类物质获取率Y（%）=（C×V/M）x100%，式中：C为萃取液中黄酮类浓度值（mg/mL），V为萃取液容积（mL），M为中药材品质（mg）。

（3）酶制剂的挑选

称量1.0g阿尔泰金银花若干份，各自向当中添加占中药材品质1.0%的纤维素酶、果胶酶、半纤维素酶、中性蛋白酶，将一份没加一切酶制剂的试品作对照实验。每一份试品各自加50倍量50%酒精，添加硫酸缓冲溶液，调pH各自设置3、4、5、6，将以上每组试品于40℃，超声波输出功率90W下超声波获取30min酶解后，每组试品经灭酶（开水浴5min），过虑获得上清液。各自从每组中加入适量萃取液，测算金银花黄酮类物质获取率。

（4）单要素实验

称量中药材1.0g，各自对超声波酶輔助获取加工工艺中的影响因素（酶加上量、料液比、获取溫度、获取時间、超声波输出功率）开展调查。酶加上量:0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、3.0%；料液比：1:10、1:20、1:30、1:40、1:50；乙醇浓度：30%、40%、50%、60%、70%；获取溫度：35℃、40℃、45℃、50℃、55℃；获取時间：10min、20min、30min、40min、50min；超声波输出功率：90W、132W、174W、216W、258W、300W。

（5）响应面试验设计

依据Box-Behnken核心组合原理，在单要素实验效果的根基上，挑选酶加上量、乙醇浓度、获取時间和获取溫度四个要素为变量，每一变量的实验各自以-1、0、1编号，以黄酮类物质获取率（%）为响应值，开展四要素三水准试验，运用Design-Expert8.05手机软件对实验多元化回归分析和二项式线性拟合，并对线性拟合方程式开展方差分析。要素水准设计方案见表1。

二、結果与剖析

1、酶制剂的挑选

不一样酶制剂在不一样pH标准下，所得的黄酮类物质获取率都不同样。伴随着pH的提升，在各种各样酶制剂功效下，阿尔泰金银花黄酮类物质获取率均出现先提高后下降的发展趋势。从图1能够看得出，化学纤维酶在pH相当于4时功效最好是，其获取率能够做到17.09%，超过中性蛋白酶、半纤维素酶、果胶酶、无酶的作用下的获取率。源液的pH为6.5，因而从获取率考虑到，更改水溶液的pH为4，且挑选纤维素酶开展下一步实验。