过氧化氢酶(CAT)为铁元素卟啉的融合酶，是一种普遍出现的抗氧化酶，能消除食品类、食用添加剂和调料在消毒灭菌、漂白剂、生产加工后造成或残存的双氧水，也可以消除乳制品等食物在紫外线照射时造成的双氧水导致的臭味，因而测量CAT活力在食品检测行业有着关键实际意义。酶的活性一般通过底物的变动来测量，而酶促反应具备高宽比特异性、高效率、不稳定和可调整等特性，因而测量CAT活力的办法各种各样。高锰酸钾溶液滴定法因常用机器设备简易，做为国家行业标准和实验教学一直被应用，但高锰酸钾溶液不稳定，实验试剂水溶液校准难，储存难，滴定管全过程中难以避免地存有很大的人为因素分辨偏差。当今化学动力学分光光度法变成一大闪光点，董等以二苯胺磺酸钠为底物进行CAT着色驱动力分光光度法测量，但着色敏感度比较有限，H₂O₂表观克分子吸光度指数ε＜5.0×10²L／(mol·cm)。文中以碘量法为基本，搭建碘酸钾-木薯淀粉着色分光光度法测量CAT活力的新管理体系。在盐酸物质中，过氧化氢空气氧化碘酸钾转化成碘，碘与木薯淀粉快速响应展现深蓝色，着色液在600nm光波长上有较大吸取峰。CAT催化反应H₂0₂溶解，根据CAT添加前后左右OD值转变值完成酶促反应测量。该办法简易，基本原理清楚，耗品少，相对性高锰酸钾溶液滴定法，检出限更低，特别适合于微生物试品少量CAT活力剖析。本试验用μtmol／mL(U／mL)来表明酶液的酶促反应，即lmL过氧化氢酶水溶液所耗费双氧水摩尔质量(μm01)。

一、试验一部分

1、仪器设备与实验试剂

7230G型由此可见光度计(深圳公司)；电子分析天平(0.1mg，上海市天平仪器厂)。

CAT标准物质(上海市鼓臣生物科技有限责任公司)贮备液：配置浓度值lmg／mL(活力约为5000U／mL)，碘量法校准；CAT切削液：0.1U／mL(应用前由贮备液稀释液)；H₂0₂栽培基质液：1μmol／mL(取0.6mL，3％H202稀释液至500mL)；0.1mol／LH₂S0₄水溶液；0.01mol／L碘化钾溶液；5g／L木薯淀粉液；0.1mol／L聚磷酸盐缓冲液(pH=7.0)。

2、测定法

取50ml容量瓶一只，添加CAT样液(酶促反应低于2U／mL)1.00mE、H₂0₂栽培基质液2.00mL，25℃水浴反映30min后马上添加1.5mL盐酸停止反映，加碘酸钾5mL，60℃水浴加热40min，制冷，加木薯淀粉3mL，滴定剂，以纯净水作参比液，在光波长600nm处测OD值A，与此同时进行酶试剂空白OD值A₀测量，依据△A(△A=A₀一A)明确过氧化氢酶活力E。

二、結果探讨

1、光谱图与较大消化吸收光波长

不一样管理体系光谱图见图1。木薯淀粉与碘化钾溶液在可见光波长区无消化吸收峰(图1曲线图1)；木薯淀粉、碘酸钾与双氧水水溶液中，双氧水空气氧化碘酸钾，淀粉溶液呈深蓝色，600nm上有较大消化吸收(图1曲线图3)，峰形锐利，最高值较高，H₂O₂表观克分子吸光度指数ε₆₀₀=2.79×10⁴L／(mol·cm)；添加CAT后，着色受抑止(图1曲线图2)，但峰位未发生改变，这表明反映仅出现于双氧水与碘酸钾中间，着色水平与双氧水成分相关。试验选择600nm作测量光波长。

2、碘酸钾使用量危害

仅对于非酶管理体系(E=0U／mL)，单纯性调查了碘酸钾使用量危害。结果显示，A随碘酸钾容积扩大，在0～3mL中间，增长幅度较快，很多的碘酸钾被氧化；在3～5mL中间，增长幅度变缓，这时候的碘酸钾关键做为助有机溶剂，I₂是非极性分子，水溶差，过多碘酸钾促进碘合正离子产生(I₂ I^–=I^–₃)，溶解性提高。显而易见，过多碘酸钾合理缓解了着色自然环境，5mL时A稳定不会改变。试验挑选5mL碘酸钾。

3、木薯淀粉使用量

用该方式取50ml容量瓶一只，添加CAT样液(酶促反应低于2U／mL)1.00mE、H₂0₂栽培基质液2.00mL，25℃水浴反映30min后马上添加1.5mL盐酸停止反映，加碘酸钾5mL，60℃水浴加热40min，制冷，加木薯淀粉3mL，滴定剂，以纯净水作参比液，在光波长600nm处测OD值A，与此同时进行酶试剂空白OD值A₀测量，依据△A(△A=A₀一A)明确过氧化氢酶活力E。别的标准不会改变，调查了木薯淀粉使用量危害。结果显示，在0～2.75mL中间，A随木薯淀粉容积扩大，2.75mL后，A趋向稳定。试验挑选3mL木薯淀粉作铬黑T。

4、盐酸使用量

取50ml容量瓶一只，添加CAT样液(酶促反应低于2U／mL)1.00mE、H202栽培基质液2.00mL，25℃水浴反映30min后马上添加1.5mL盐酸停止反映，加碘酸钾5mL，60℃水浴加热40min，制冷，加木薯淀粉3mL，滴定剂，以纯净水作参比液，在光波长600nm处测OD值A，与此同时进行酶试剂空白OD值A₀测量，依据△A(△A=A₀一A)明确过氧化氢酶活力E。别的标准不会改变，调查盐酸容积对显色反应危害，并同歩进行pH测量(图2)。结果显示，当V(H₂SO₄)=1.5mL时，pH=1.80，着色最彻底，A值超过较大。0.1mol／LH₂SO₄水溶液最好使用量为1.5mL。