目地运用超高效率液相色谱仪串连四级杆路轨阱质谱分析(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术检查鉴定补阳还五汤以及在人血液和小便中药品成分。方式收集补阳还五汤以及临床医学病人内服给药后的血细胞和小便样版，样版经80%工业甲醇污水处理后，选用Hyperil Gold C18色谱柱(1.0 mm×50 mm，1.9μm)，流动性相为水(A)-乙腈(B)(各含0.1%苯甲酸和5 mmol·L1醋酸铵)开展梯度方向过柱，流动速度0.3 mL·min1，柱温40℃。根据数据分析补阳还五汤、给药后代血液和给药后代小便样版，与此同时融合化学物质的质谱分析破裂规律性，表现其中药制剂、含药血液和小便中药品成分。結果在汤药中国共产党评定了5五个化学物质；在给药后病人的血液中国共产党评定了34个化学物质；在小便中评定了23个化学物质。这种成份主要是黄酮类化合物、多糖类、苯碱类、苯酞类和人参皂甙类物质。结果本科学研究全方位表明了补阳还五汤以及在人血液和小便药品成分，为揭露补阳还五汤真真正正医治脑中风的药力物质条件给予了参照。

补阳还五汤由黄芩生、当归尾、白芍、地龙、羌活、紅花、杏仁等7味常见中药构成，是养血活血化瘀的意味着方[1]。补阳还五汤常见于医治脑颅损伤意外并发症中脑缺血脑中风。药理学分析证实，补阳还五汤能够降低颈髓损伤位置的细胞坏死[4]，推动脑栓塞后毛细血管转化成，减少毛细血管体细胞粘附分子结构和栽培基质金属材料胰蛋白酶-9的表述，减少C-c反应蛋白和血糖水准，具备抗血管粥样硬化功效等。补阳还五汤医治脑缺血脑中风药力准确，可是其药力物质条件尚不确立。中药材药力物质条件科学研究是诠释中药材总体作用及功效实质的主导阶段，现阶段对补阳还五汤和其在身体的临床药理学的评定剖析已经有相关的参考文献报导，如Liu等运用高效率液相色谱仪-二极管列阵探测器-航行時间质谱分析(HPLC-DAD-TOF/MS)技术性融合化学物质精准分子离子和特点残片正离子在补阳还五汤中一共评定了54个化学物质，主要是喹诺酮类、黄酮类化合物、多糖类、大豆异黄酮类、单萜苷类、人参皂甙类、有机物和碳水化合物。在身体的有关分析如沈晓等运用超高效率液相色谱仪-四极杆-航行時间质谱分析(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术性融合精准相对性分子质量和特点残片离子对大鼠灌胃补阳还五汤后的脑部中国共产党检验到五个化学物质，在血液中检查到七个化学物质，与此同时杨东辉等[10]运用高效率液相色谱仪-二极管列阵探测器-线形正离子阱质谱分析(HPLC-DADitrap/MS)融合化学物质精准相对性分子质量、特点残片正离子和紫外线消化吸收特点在猪的血清蛋白中国共产党评定了4五个化学物质，以上科学研究均为揭露补阳还五汤的药力物质条件给予了试验根据，可是其在临床医学上的有关科学研究并未见参考文献报导，而药品仅有进到身体后才可以起到药力，故对补阳还五汤在人体内的临床药理学科学研究，更有利于诠释其药力物质条件。本探讨使用的超高效率液相色谱仪串连四级杆路轨阱质谱分析(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS)技术性具备迅速、精确、敏感度高的特性，创建此统计分析方法对补阳还五汤以及在人血液和小便药品成分开展迅速剖析，将为揭露其医治脑缺血脑中风的物质条件给予更为有益的试验根据。

1仪器设备与原材料

Vanquish UHPLC超高效率液相色谱、QE-HF-X型质谱仪器、ST16R型冷冻离心机均来自于英国Thermo企业；血液采血管(英国BD企业)；尿杯(上海市高创有机化学高新科技有限责任公司)；工业甲醇、水、苯甲酸、醋酸铵(LC-MS级)均购自英国Thermo企业，别的实验试剂均为分析纯。补阳还五汤严苛遵循原方黄芩生120 g、当归尾6 g、白芍415 g，地龙、羌活、杏仁、紅花各3 g配制水煎而成。阿魏酸(生产批号：EB04168；纯净度≥99%)、毛蕊大豆异黄酮苷(生产批号：EB07531；纯净度≥98%)标准品均购自上海市士锋生物技术有限责任公司；黄芩人参皂甙Ⅲ(生产批号：B20567；纯净度≥98%)、洋羌活内酯H(生产批号：B21462；纯净度≥98%)标准品均购自上海源叶生物技术有限责任公司。

2方式

2.1临床医学样版收集

任意选择6名被诊治为脑中风病人(男孩和女孩参半)，忌食4 h，服食补阳还五汤后，各自在1，2 h收集病人的血细胞和小便样版，血液和小便离心式(3 000 r·min1，10 min)，取上清液约0.5 mL，混和不一样时间点的血细胞和小便样版后冷藏储存于80℃，预留。

2.2样版前解决

各自取补阳还五汤、解除冻结后的血细胞和小便样版100μL至EP管内，添加400μL含0.1%苯甲酸甲醇溶液，涡流波动1 min，冰浴静放5 min，以15 000 r·min1、4℃下离心式10 min，取300μL上清液加LC-MS级水稀释液至500μL，应用带有0.22μm滤纸的移液管中以10 000 r·min1、4℃下离心式10 min，搜集渗沥液，气相剖析。

2.3标准品切削液配置

高精密称加入适量的阿魏酸、毛蕊大豆异黄酮苷、黄芩人参皂甙Ⅲ和洋羌活内酯H标准品，放置10 mL深棕色量瓶中，用工业甲醇融解并稀释液至标尺，混匀，各自配出浓度值为10.0，10.0，20.0，10.0 mg·mL1的贮备液。各自取各标准品贮备液适当，放置同一个10 mL深棕色量瓶中，用工业甲醇稀释液配置标准品混和切削液，储存于20℃电冰箱。

2.4 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS剖析

离子交换柱为Hyperil C18(1.0 mm×50 mm，1.9μm)；流动性相为水(A)-乙腈(B)(各含0.1%苯甲酸和5 mmol·L1醋酸铵)；流动速度为0.30 mL·min1；气相量为2μL。梯度方向过柱：0~2 min，2%B，2~12 min，2%→100%B，12~14 min，100%B，14~14.1 min，100%→2%B，14.1~16 min，2%B。扫描仪范畴挑选m/z 100~1 500；ESI源：毛细血管工作电压为3.2 kV；鞘气流动速度：35 arb；輔助汽体流动速度：10 arb；毛细血管溫度：320℃。MS/MS二级扫描仪为数据信息依赖感扫描仪。

2.5补阳还五汤成分和其在人血及小便中药品成分的评定

选用LC/MS标准对补阳还五汤试品与人血及小便试品开展检测分析。根据较为补阳还五汤试品、给药组血液和小便的总离子流图和化学物质质谱分析破裂规律性评定药品成分，并对主要成分采

3結果

3.1 UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS色谱图的收集

依据创建的检测统计分析方法，在正、空气负离子方式下收集补阳还五汤试品和给药人血液及小便试品的色谱，結果见图1。