将聚集塑造的泥样梯度方向稀释液后,施胶于加上柚皮苷的挑选培养液,30℃颠倒塑造,每日观查冒出的菌体形状及全透明圈发生状况。挑菌初筛发生全透明圈的菌体,分离纯化后挑菌单菌体点样至挑选平板电脑。挑选平板电脑分四块地区点样后放进30℃恒温箱颠倒塑造,7d后得到1株有显著全透明圈菌种,如图所示1。将该菌种取名为DTC03。
观查平板电脑中的菌体形状,其菌体呈乳白色,不全透明,边沿不规律,表层不光滑的半球形菌体(图2a)。革兰氏染色后发觉菌种DTC03为长杆状的革兰氏阳性菌(图2b)。芽胞上色说明该菌种DTC03能够造成芽胞(图2c)。依据菌体形状,菌体形状,基本判断菌种DTC03归属于枯草芽孢菌属。
菌种DTC03明胶液化实验、吲哚实验、葡萄糖水、甘油果糖实验均呈阳性,甲基红实验为呈阴性(表1)。
将PCR扩增物质送至南京市思普金生物技术有限责任公司转录组测序,测得菌种DTC03的16SrDNA的编码序列为1392bp。将编码序列与NCBI数据库查询开展比照,数据显示该菌种DTC03的16SrDNA序列与贝莱斯枯草芽孢菌(Bacillusvelezensis)的16SrDNA序列相似性达99.93%。挑选与其说亲缘关系较近的菌种开展核对,并应用MEGA7搭建进化树,結果如图所示3所显示,该菌是芽胞菌属,且与Bacillusvelezensis同宗相似度最大。融合形状和生理学生物化学特点,将评定菌种DTC03为Bacillusvelezensis。现阶段世界各国还没有Bacillusvelezensis产α-L-鼠李甘酶的有关报导。