紅花，为一年生草本植物菊科红花属绿色植物，主茎呈冠状动脉，叶柄健壮，花丝多呈红、桔红、桔黄色、黄、淡黄、白等色。种籽为瘦果，种沁色分白、灰、黑、褐黑色，开花期为一年的6～7月份，结果期为8～9月份。红花籽粕是红花籽提油后的副产物，压榨油后的红花籽粕有二种：即带壳籽粕和去壳籽粕，在其中带壳的蛋白质含量为19%，而去壳的蛋白质含量达到40%。即便带壳籽粕的营养成分还可以与紫花苜蓿相提并论，在养殖业中作为精饲料加上，能为肥育家畜的精饲料；而去壳籽粕则更与亚麻子油饼类似，在老母鸡精饲料中可同时替代蛋白加上。有新闻报道称，根据对一部分市面上红花籽粕的科学研究，营养成分指标值测量如下所示：在其中粗脂肪20%、膳食纤维31%、粗蛋白吸收率78%、膳食纤维吸收率14.3%，因为其吸收率较高，尤其适用做为乳牛精饲料，对产奶量及质量都会有非常大程度上的提升 ，是一种十分具备研发使用价值的副产物；红花籽粕所含蛋白质碳水化合物归属于彻底碳水化合物，带有身体需要的18种碳水化合物，在其中8种必须氨基酸成分较高，约占碳水化合物总产量的30%上下；除此之外，红花籽粕在农牧业中可以用做抗冷剂、抗虫剂和有机肥等。

红花籽粕带有充足的蛋白质，其配制成的抗氧化性肽具备极强的复原力，中国对红花籽粕蛋白质运用科学研究的非常少，为提升红花籽粕运用市场前景，本分析选择蛋白酶k，并添加超声波輔助水解反应，对红花籽粕蛋白质的提炼加工工艺完成提升，为红花籽粕的开发利用及开发设计有关高效益的功能食品给予技术性根据。

一、试验原材料与方式

1、原材料与仪器设备

红花籽粕：新疆省原产地；蛋白酶k、蛋白酶和枯草枯草芽孢菌中性蛋白酶：上海市比多实业公司有限责任公司；三氯化铁、铁氰化钾、30%双氧水、盐酸、硼酸、硫酸、磷酸氢二钠、工业乙醇、氢氧化钠溶液、酚酞、三氯乙酸、室内甲醛、碱性品红、磷酸二氢钠：购于郑州市莱博实验仪器有限责任公司；实验试剂均为分析纯。UNIVERSAL320快速冷冻离心机：Hettich有限责任公司；AUY120电子分析天平：SHIMADZUCORPOPATIONJAPAN；722E由此可见光度计：上海市光谱仪器有限责任公司；ALPHAL-2真空泵冷冻式干燥机：法国M.CHRIST企业；HH恒温水浴锅：江苏金坛广州中山大学仪器厂；PHS-25酸度计：上海雷磁仪器厂：C21-IH02E9电磁灶：浙江省苏泊尔股权有限责任公司；YP202N电子分析天平：上海精密仪表设备有限责任公司。

2、实验方法

（1）实验试剂的配置

pH7.0聚磷酸盐缓冲溶液：量取61mL的0.02mol/L磷酸氢二钠水溶液和39mL的0.02mol/L磷酸二氢钠，混和匀称，即是pH7.0聚磷酸盐缓冲溶液。

0.02mol/L氢氧化钠溶液标液：称量0.8g氢氧化钠溶液溶解于水，滴定剂至100mL。0.05mol/L甘氨酸标液：精确称量375mg甘氨酸，融解后滴定剂至10mL。400mL中性化甲醛溶液：在50mL36%～37%分析纯甲醛溶液中添加1mL0.5%酚酞酒精溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液水溶液滴定管到微红，贮于密闭式的瓶子中。

（2）红花籽粕酶解液的制取

提油后的红花籽粕用高速粉碎机开展破碎，过50目筛，取2.5g红花籽粕于小烧瓶中，添加50mLpH7.0的硫酸铵缓冲液，于恒温水浴锅55℃水解反应1h，灭酶活（100℃，10min）在10000r/min转速比下冷藏离心式15min，取上清液，预留。

（3）酶魅力的测量

①超音波前后左右酶魅力的测量

提前准备6支整洁的试管婴儿，各自取酶液1mL于试管婴儿中，番木瓜酶液、中性化酶液、蛋白酶液各两只试管婴儿，在其中三支作空白试验，此外三支先后添加3mLpH7.0磷酸缓冲液，37℃恒温水浴锅中加热10min，添加pH7.0磷酸缓冲液配置的1%opo结构脂水溶液1mL，混匀，37℃水浴10min或55℃标准下要超音波解决10min，，取下添加10mLTCA（三氯乙酸）水溶液中止反映，强烈摇晃，37℃水浴三十分钟，冷藏离心式取上清液作7倍稀释液，275nm处测OD值值A。空白试验：在添加底物以前添加TCA水溶液。

②胰蛋白酶酶魅力测算

提前准备6支整洁的试管婴儿，各自取酶液1mL于试管婴儿中，番木瓜酶液、中性化酶液、蛋白酶液各两只试管婴儿，在其中三支作空白试验，此外三支先后添加3mLpH7.0磷酸缓冲液，37℃恒温水浴锅中加热10min，添加pH7.0磷酸缓冲液配置的1%opo结构脂水溶液1mL，混匀，37℃水浴10min或55℃标准下要超音波解决10min，，取下添加10mLTCA（三氯乙酸）水溶液中止反映，强烈摇晃，37℃水浴三十分钟，冷藏离心式取上清液作7倍稀释液，275nm处测OD值值A。空白试验：在添加底物以前添加TCA水溶液。每分水解反应造成1µg色氨酸需要的酶量，即是一个酶活企业（U）。由色氨酸规范曲线方程（A=aC b）及酶活界定推得：

酶活=（A-b）×N/（a·水解反应時间）（1）

式中N为稀释倍数8；

A为吸光度值；

酶活企业为U/mL。

（4）L-色氨酸标曲的创建

精确称量于105℃干躁至恒重的L-色氨酸0.1g，用20mL1mol/L硫酸融解后，再用纯净水滴定剂至100mL，即是1mg/mL色氨酸标液。汲取1mg/mL色氨酸标液10mL，用0.1mol/L硫酸滴定剂至100mL，即获得100µg/mL的L-色氨酸规范液。各自汲取100µg/mL的L-色氨酸规范液0、1、2、3、4、5、6mL于10mL容量瓶中，用纯净水滴定剂至标尺，混匀，做成1ml各自含L-色氨酸0、10、20、30、40、50、60µg的规范应用液，在275nm下测量各浓度值色氨酸水溶液的吸光度值，以色氨酸浓度值为横坐标轴，以该浓度值下水溶液所相匹配OD值为纵轴作标曲，测算线性回归方程和R2值。

（5）水解度的明确。

水解度DH=分散氮/高锰酸盐指数

①测高锰酸盐指数量（凯氏定氮法）

参照GB5009.5开展高锰酸盐指数的测量，在开展试品检测的一起做实验试剂空缺，测算高锰酸盐指数成分。

②室内甲醛滴定法测量分散氮

移取2mL旋蒸的溶解液，各自放置250mL的锥形瓶中，放水25mL；在其中一份加3滴中性化红显色剂，用校准的NaOH水溶液滴定管至棕色为终点站。另一份添加中性化室内甲醛10mL及3滴百里酚酞显色剂，混匀，静放1min，（这时深蓝色消退）。再用以上校准过的NaOH水溶液滴定管至浅蓝色。纪录2次滴定管所耗费的NaOH的mL数，测算分散氮的成分。

（6）复原力的测量

配置一系列浓度值为5%的红花籽粕底物水溶液（取2.5g籽粕，加缓冲溶液50mL），各自添加中性蛋白酶、蛋白酶k、蛋白酶，先调整pH，开展超音波解决10min，水解反应1h，反映完毕之后历经100℃灭酶解决10min，在10000r/min转速比下开展冷藏离心式，時间为15min，上清液历经低温干燥储备用。采用上清液来测量酶解液的复原工作能力。

取上清液预留，将酶解液稀释液1倍，取1.0mL红花籽粕酶解液于10mL的试管婴儿中，先后添加0.2mol/LpH6.6的聚磷酸盐缓冲溶液2.5mL、质量浓度为1%的铁氰化钾水溶液2.5mL而且充足搅拌匀称，于50℃标准下水浴维持20min，并快速制冷，随后添加质量浓度为10%三氯乙酸水溶液2.5mL，而且充足搅拌匀称，在3000r/min转速比冷藏离心式10min。汲取离心式后的上清液2.5mL，添加纯净水2.5mL和质量浓度为0.1%三氯化铁溶液0.5mL，静放10min，在700nm光波长下测量水溶液吸光度值，全部测量值均为三次数据信息均值。以700nm光波长处的吸光度值尺寸来体现酶解液的复原力的大小，吸光度值越大，说明酶解液的抗氧化越强。