2.4 PCI2体细胞中的ROS水准及MDA成分

ROS关键来自损害的膜蛋白，当体细胞内造成过多的ROS或身体还原剂成分超出体细胞的抗氧化性回复工作能力时，体细胞便会造成氧化应激。本实验以DCFH-DA做为荧光探针，检验2’，7’-二氯荧光素(DCF)的莹光抗压强度就可以得知体细胞内ROS的水准。与空白试验组对比，90μmol/LH202解决PCI2体细胞4h后，体细胞内ROS水准明显提升(P＜0.01)，做到460.43％(图4a)，使人体细胞造成明显的空气氧化损害；经脂溶性提取液预备处理后，可以明显地抑止PCI2体细胞内ROS的造成(P＜0.01)，其中2mg/L脂溶性提取液预备处理体细胞8h后，ROS成分为208.37％。光学显微镜观查上色后的PCI2体细胞发觉，体细胞展现的莹光抗压强度转变 与组织细胞内ROS水准趋势分析一致(图4b)。因而，脂溶性提取液能够合理地消除ROS，减轻H202引起的线粒体功能阻碍。
 

当小动物或植物细胞造成氧化应激时，会产生脂类空气氧化，而MDA是一种生物脂类空气氧化的天然药物化学，能够用于明确脂类空气氧化水准。与空白试验组对比，90μmol/LH₂0₂解决PCI2体细胞4h后，MDA成分明显增加(P＜0.01)，做到192.98％(图5)；经脂溶性提取液预备处理8h后，可以明显地阻拦MDA的造成(P＜0.01)；而一切正常体细胞经脂溶性提取液解决后，在无H₂0₂损害的情形下，其MDA成分可减少至25.71％。

2.5 脂溶性提取液对PCI2细胞坏死的危害

为了更好地进一步研究脂溶性提取液能不能合理地抑止细胞坏死，运用AnnexinV-FITC/PI开展上色，经流式细胞术检验细胞坏死率(图6a)。如图所示6b所显示，与空白试验组(8.14％)对比，H₂0₂解决明显提高了细胞坏死率(23.66％)，经朝鲜蓟脂溶性提取液预备处理后，PCI2体细胞的细胞凋亡获得明显抑止。在其中，历经2mg/L脂溶性提取液预维护后，细胞坏死率减少至8.75％。

为了更好地更为直接地较为不一样解决组的细胞坏死状况，运用A0-EB对体细胞开展上色，根据光学显微镜观查体细胞形状。如图所示6c所显示，空白试验组的体细胞由于吖啶橙(A0)通过其详细的细胞质置入DNA，基本上所有展现翠绿色莹光，体细胞形状一切正常。沒有显著的细胞凋亡有关组织学更改；经H202解决的实体模型组的体细胞发生了弱化、核凝结等发翠绿色莹光的初期细胞凋亡状况，而且由于溴化乙锭(EB)通过其受损的细胞质置入DNA，展现出橘黄莹光的末期细胞凋亡状况：而历经朝鲜蓟脂溶性提取液预备处理的PCI2体细胞展现出初期细胞凋亡和末期细胞凋亡体细胞皆有降低的状况，并展现浓度值依赖感。

3 结果

本实验研究了朝鲜蓟副产品中脂溶性提取液对PCI2神经元细胞的保障功效。运用GC-MS对朝鲜蓟副产品中萜类及谷甾醇类物质开展判定与定性分析，结果显示，关键带有3种倍半萜内脂，2种谷甾醇及8种五环三萜。实验以H202做为空气氧化损害诱导剂，研究朝鲜蓟副产品脂溶性提取液的身理活力，发觉该提取液可减少PCI2神经元细胞的空气氧化损害，而且随着体细胞内LDH露出率、MDA成分及ROS水准的减少。历经AnnexinV-FITC/PI双染及A0-EB双染后发觉，经脂溶性提取液解决的PCI2细胞坏死率明显减少，与光学显微镜的观测結果一致。综上所述，朝鲜蓟副产品脂溶性提取液对PCI2神经元细胞具备抗细胞凋亡及防护功效，非常值得进一步的综合利用与科学研究。