5、响应面BOX-Behnken试验设计

在单要素试验效果的根基上，对发醇培养液构成开展响应面提升。选择变量要素为A-魔芋精粉、B-酵母菌浸粉、C-Mn2² ，响应值(R1)为酶活。应用手机软件Design-Expert10.0.7对以上要素开展回应斜面多元回归分析，对发醇培养液的构成开展提升。BOX-Behnken实验要素水准表如表1:

二、結果与剖析

1、菌种的剥离与挑选

将聚集细胞培养液的封闭液施胶于挑选培养液，产甘露聚糖酶的菌种会在培养液上生长发育，为此来挑选菌种。选择涨势较好且菌体直徑大的10株单菌体进到复筛，并定名为NSG-1、NSG-2、….NSG-10。

将挑选获得的10株菌开展摇瓶发醇，用DNS测定方法粗酶液酶魅力。結果如图所示1所显示，NSG-6在经耐碱性试验后酶魅力为1.78U/mL相对性最大，其一切正常酶魅力为2.05U/mL，故将其做为供试菌种。

2、菌种评定

PCR物质琼脂糖凝胶电泳結果即Marker构成见图2。Marker中3000bp、1000bp和500bp杂带浓度值为60ng/3μL表明为增亮带，其他杂带浓度值均为30ng/3μL，电泳原理方位从上到下。从电泳原理結果得知:PCR扩增物质杂带清楚、沒有托尾状况，且相对分子质量在1400bp上下与16SrDNA片段相符合，可开展事后试验。

转录组测序結果如图所示3所显示，NSG-6的16SrDNA序列共1473bp。将该编码序列上传至NCBI开展BLAST，随后用手机软件MEGAX对16SrDNA序列开展开放阅读框核对，一部分結果见表2。选用相邻联接法搭建NSG-6与相关病菌16SrDNA的系统发育树(类似的反复测算1000次)，結果见图4。由开放阅读框核对結果和系统发育树得知，NSG-6与EnterobacterludwigiiEN-119(NR042349.1)相似度做到100%，分辨其为路德维希肠杆菌。

3、响应面Box-Behnken试验设计提升結果

（1）响应面设计方案結果

单要素试验結果如下所示，培养液构成:魔芋精粉2.5%、酵母菌浸粉2.5%、MnSO₄0.5%；发醇标准:当然pH、接种量2.00%、发酵温度35℃、摇床转速比230r/min。

应用手机软件Design-Expert10.0.7对培养液构成开展响应面设计方案，結果见表3。再对其信息开展多元线性回归线性拟合，得到多元化回归分析实体模型:

R1=4.85 0.84A 0.20B-0.26C 0.11AB-0.25AC 0.27BC 0.35A₂-0.24B₂-0.63C₂R₂=0.9958

在其中R1是预估的甘露聚糖酶的酶活，A是魔芋精粉加入量，B是酵母菌浸粉加上量，C是硫酸锰加上量。