高脂肪饮食搭配可造成 血糖上升，比较严重时可造成一些伤害身体健康的病症，如主动脉粥样硬化、心肌梗塞和慢性胰腺炎等，已成为了现代社会群体关键的营养成分难题之一。除此之外，长期性服用高脂肪饮食还可造成 体脂率出现异常累积和肠道微生物群的不平衡。根据饮食搭配干涉防止由高脂肪膳食导致的健康问题正成为了科学研究的网络热点。

抗性淀粉在直肠中无法被酶解消化吸收，而在直肠中可被酵解，其根据上消化道进到肠子，经病菌进行发酵造成短链脂肪酸，调整肠菌，降低血糖和碳水化合物，抑止脂肪细胞的消化吸收累积，改进炎症。盲肠是肠子的起止段，尽管盲肠、乙状结肠是病菌最集中和多元化的地区，且二者內容物中有益菌构造具备相似度，可是优点有益菌存有差别。现阶段有关盲肠中有益菌转变 特点与改进因高脂肪饮食搭配诱发血脂高和血糖高关联的探讨罕见报导。紫山药（PurpleDioscoreaalataL）为多年生长 蔓生植物薯蓣（DioscoreaalataL）的根茎，在中国沿海地区普遍栽种，木薯淀粉约占微生物总产量的16%～20%。

本分析以紫山药高抗性淀粉为原材料，揭露紫山药高抗性淀粉对盲肠微生物菌种的益生功效以及改进高脂血症效率，能为盲肠有益菌及脂质代谢与身心健康的分析给予根据。

1原材料和机器设备

1.1原材料与实验试剂

紫山药（紫玉淮山），产于福建三明市建宁县。普鲁兰酶（2800U/g）、高溫α-胃蛋白酶（8000U/mL），英国Sigma企业；木薯淀粉葡糖苷酶（100000U/mL），上海市麦克林生物化学高新科技有限责任公司；D-葡萄糖水诊断试剂盒，西班牙Megazyme公司；血糖检测试剂盒，南京建成生物技术研究室；ＴIANampStoolDNAkit检测试剂盒，天根生化高新科技有限责任公司；柠檬酸钠、氢氧化钠溶液、磷酸氢二钠、工业乙醇均为国内分析纯。基本精饲料成份：糖类与碳水化合物72.3%、蛋白14.9%、人体脂肪12.8%；高脂肪精饲料成份：酯化椰油5%，食用油5%，碳水化合物0.2%和基本精饲料89.8%。精饲料购自南通市特洛菲精饲料高新科技有限责任公司。

1.2关键机器设备与仪器设备

DHG-9003A型暖风烘干箱，上海精宏实验设备有限责任公司；SYQ-DSX-280B型高压灭菌器，上海申安医疗器械厂；ＴDL-5-A型低速离心机，上海安亭科学研究仪器厂；ＶERＴEX70型傅立叶光谱分析仪，法国布鲁克分析仪企业；GA-3型测血糖仪器，三诺生物感测器股权有限责任公司；CFX96型荧光定量PCR仪，英国Bio-Rad公司；PE300型IlluminaMiSeq转录组测序仪，英国Illumina企业。

2实验方式

2.1紫山药抗性淀粉的制取

紫山药木薯淀粉的制取见参考文献。将50.0g紫山药木薯淀粉（干基），加至200mL硫酸铵缓冲液（0.2mol/L，pH5.0）中烧开30min，减温至58℃；添加普鲁兰酶（2800U/g）拌和12h；调整至7.0，120℃隔热保温30min，制冷至4℃储藏24h，不断2次；将沉积粉40℃干躁后，称量20.0g添加100mLpH6.0醋酸钠缓冲液，提温至90℃，添加0.3mL高溫α-胃蛋白酶（8000U/mL）维持1h，制冷至60℃并且用稀释液的柠檬酸钠调整pH至4.5，添加0.3mL木薯淀粉葡糖苷酶（100000U/mL）维持1h；以3000×g离心式15min，纯净水清洗木薯淀粉3次，摩尔分数95%酒精清洗3次，40℃干躁24h，破碎过100目筛，得高抗性淀粉（HRS）。系统检测，HRS中的迅速消化吸收木薯淀粉、迟缓消化吸收木薯淀粉和抗性淀粉的成分各自为11.4%，28.4%和60.2%。

2.2 FTlR剖析

傅里叶变换红外光谱分析（FＴIR）剖析依据Wang等的方式稍做改动。将烘干的HRS试品与溴化钾以1∶100～1∶150的比率实现混和，充足碾磨。将打磨好的粉末状倒进磨具中真空包装压片糖果，12MPa的工作压力下维持30s，压至全透明，在4000～400cm^-1扫描仪区域内运用傅里叶变换红外光谱分析扫描机观查。

2.3细胞模型创建

男性金黄地鼠，SPF级，6～8周龄，休重90～110g，购自北京市维通利华动物实验技术性有限责任公司。适应能力饲养1星期过后，将32只金黄地鼠任意分成4组喂养：一切正常对照实验（NC）：基本精饲料 相等盐水；实体模型组（MC）：高脂肪精饲料 相等盐水；HRS小剂量组（LR）：高脂肪精饲料 0.5g/100gbw高抗性淀粉；HRS高使用量组（HR）：高脂肪精饲料 1.5g/100gbw高抗性淀粉。金黄地鼠随意吃料、饮用水，10h/14h白天更替饲养4周。

2.4盲肠內容物搜集

在第2和第4个礼拜天忌食12h，各实验组各自屠宰3只和5只金黄地鼠，搜集盲肠內容物包裝后于-80℃冷藏。

2.5血清蛋白指标值测量和内脏器官转变

在第4礼拜天眼圈采血后处决，迅速脱离肝部、肾脏功能、肝脏、附睾囊肿和肾周的脂肪细胞合称重；将血夜搜集在采血管中，于4000r/min、4℃离心式15min，血清蛋白散装在1.5mL离心管架中，于-20℃储存预留；依照血糖测定试剂盒使用说明测量甘油三脂（ＴG）、总胆固醇（ＴC）、密度高的蛋白碳水化合物（HDL-C）和高密度蛋白碳水化合物（LDL-C）的浓度值。

2.6 DNA获取和16SrDNA遗传基因PCR扩增

应用ＴIANampStoolDNAkit检测试剂盒从金黄地鼠盲肠內容物中获取DNA。以盲肠內容物中病菌基因为模版，以520F和802R为上中下游引物设计，增加16SrDNA的Ｖ4区。在其中，PCR反映管理体系（50μL）：10×Ｔaqbuffer5μL；dNＴP5μL；上游引物515F（20μmol/L）0.5μL；中下游引物设计806R（20μmol/L）0.5μL；Ｔaq酶0.5μL；模版1μL；ddH2O37.5μL。PCR反映标准：94℃3min；94℃45s，50℃60s，72℃90s，3五个循环系统；72℃10min。

2.7转录组测序数据信息的生物特征剖析

选用Illumina企业的ＴruSeqNanoDNALＴLibraryPrepKit制取转录组测序百度文库，在IlluminaMiseq转录组测序仪上开展转录组测序；将转录组测序杂带拼凑，依照与参考编码序列≥97%的相似性聚类算法，创建OＴU，并明确种型型。运用热点图和归类构成剖析（LEfSe剖析）各自科学研究金黄地鼠盲肠有益菌进化速率和归类构成的转变。

2.8数据分析

全部检验一式3份，选用DPS8.0程序包开展应用统计学剖析。結果表明为：均值±相对标准偏差。方差分析按5%显著性检验开展。