2.2.2碱溶液浓度值和水解反应時间的挑选

以NIST 1849a秘方奶粉质量控制样做为研究对象，应用2、3和4 mol/L 3种浓度值的LiOH水溶液各自水解反应18、20和22 h，测量的谷氨酸成分如图4所显示。由图中数据得知，2和3 mol/L碱溶液经22 h仍沒有水解反应彻底，而4 mol/L的LiOH在18 h早已水解反应彻底，再次水解反应20和22 h沒有显著转变，为了更好地确保充足的水解反应，以精确测量总谷氨酸的成分，挑选4 mol/L LiOH水解反应水溶液、水解反应時间20 h做为最好的溶解标准

2.2.3水解反应溫度的明确

为调查水解反应溫度的危害，设计方案了100、110、120 ℃ 3个水解反应溫度开展调查，結果见图5。由图中数据由此可见，110和120 ℃水解反应結果在18和20 h的过程中无明显差别，但120 ℃在22 h之后发生了显著的降低；而在100 ℃标准下，试品水解反应至22 h仍然无法水解反应彻底，且提升反应速度后，谷氨酸浓度值反倒产生了降低，根据谷氨酸标准物质的碱水解反应试验认证，发觉水解反应時间太长，分散谷氨酸会一部分被毁坏，故本方式挑选110 ℃做为水解反应溫度。

2.2.4食用碱打法内标明确

因为碱水解反应全过程溫度高，时间长，对不一样的试样开展加标回收实验发觉谷氨酸长期在高溫浓度较高的的碱中会出现一定程度上的损害，并且不一样栽培基质中谷氨酸的损害不一样。实验提高了在碱水解反应全过程中充氮维护的对策，结果显示谷氨酸的损耗在充进N2维护后略微改进，但应用冲氮维护下碱水解反应的办法检测质量控制样NIST1849a，結果仅为168 mg/100 g，不可以做到令人满意的結果；参照规范GB/T 15400—2018 《饲料中色氨酸的测定》在水解反应前对试品开展除脂，实验结果显示除脂仅对水解反应液的外型有一定的更改，对检测結果沒有改进。因而在提升前解决方式不能合理减少谷氨酸损害的条件下，选用谷氨酸的构造类似物做为内标开展同歩校准，提升 定量分析精确性的与此同时简单化试品解决流程。本方式将5-羟基-谷氨酸和α-羟基-谷氨酸做为研究对象来调查其做为内标物定量分析碱水解反应方式测量谷氨酸成分的可行性分析。

依次挑选了NIST质量控制样1849a和1869做为研究对象，各自添加5-羟基-谷氨酸和α-羟基-谷氨酸内标后，开展碱水解反应。表2不一样定量分析方法和不一样内标底定量分析数据显示，同样标准下为α-羟基-谷氨酸做为内标获得的两个质量控制样的成分均能达到明确的范畴，而5-羟基-谷氨酸做为内标获得的結果较高，外标法定量分析的效果则达不上质量控制样的明确低限。以α-羟基-谷氨酸做为内标来定量分析能获得更加确切的結果。

2.3方法学认证

2.3.1线性范畴和定量限

精确汲取谷氨酸标液（100 μg/mL）20、100和500 µL、1.0、2.0和5.0 mL于10 mL容量瓶中，添加100 µL内标（1 mg/mL）切削液，自来水滴定剂至标尺，搅拌后获得浓度值分別为0.2、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0 μg/mL的规范工作中水溶液，各自将规范系列产品切削液依照浓度值由低到高的次序引入液相色谱中，测得相对应色谱仪峰的峰总面积，以系列产品混和规范切削液的含量为横坐标轴，以总体目标化学物质的峰总面积与内标底峰总面积的比率为纵轴，制作标曲。相关系数r＞0.999，遮盖方式定量限和普遍试品的占比水准，线形优良。将S/N＞10且能精确定量分析的最少浓度值点测算出的成分明确为方式的定量限。結果见表3。

2.3.2方式准确性和精度

实验选择象征性试品开展加标回收实验，试品各自为婴幼儿配方奶粉、乳蛋白一部分水解反应试品和碳水化合物秘方试品，对试品开展平行面实验得到本底值后再对每一个试品做0.5倍、1倍和2倍本底值水准的加标实验，以利用率和相对性相对标准偏差（RSD）评价方法的准确性和精度。实验试品利用率和RSD见表4。试品的均值利用率在92.5%~97.4%中间，RSD差均低于3.11%。将检验试品选择4家组织开展认证，试验室间RSD低于6.7%，表明了较好的准确性和精度。

2.3.3具体试品运用

选用开发设计的办法对21个不一样类型试品开展测量。试品包含不一样知名品牌婴幼儿配方奶粉8个、乳蛋白一部分水解反应秘方食品类4个、乳蛋白深度水解秘方食品类4和碳水化合物秘方食品类5个。试品中谷氨酸成分标准为170~315 mg/100 g，利用率92%~98%，均合乎GB 10765—2010《食品安全国家标准婴儿配方食品》中对谷氨酸成分的规定。

3.结果

本分析以α-羟基-谷氨酸为内标物，选用碱水解反应-高效液相色谱色谱分析测量了奶粉及独特医药学主要用途宝宝秘方食品类中的谷氨酸。内标法不错的校准了水解反应历程中高溫、浓度较高的碱溶液和不一样栽培基质在处理中对谷氨酸的危害，与此同时省去了前处理方式中充氮维护等流程，对该办法开展方法学认证，也可以得令人满意的准确性和精度。运用于不一样品种的试样和质量控制样中总体目标物的测量均合乎明确值，说明该办法使用简易、精确度高，可重复性好，适用奶粉及独特医药学主要用途宝宝秘方食品类中谷氨酸的精确判定定量分析，能为公司生产加工和相关部门管控给予基础理论支撑点。