多管发酵、纸条法和酶底物法是当前测量地下水中粪沙门氏菌群的常见规范方式,根据三种方式对粪大肠菌群国家标准物质和具体地下水样开展剖析检验,结果显示:多管发酵、纸条法和酶底物法用以粪大肠菌群的检验結果具备一致性;根据三种方式利弊的比照,多管法低成本适用基本检验,纸条法高效率便捷更适用大批快速检测,酶底物法使用简易,不会受到场所限定可立即当场检验,更适用紧急当场检测。

序言

粪大肠菌群又被称为耐高温大肠杆菌，是在44.5℃能生长发育并发醇乳酸菌产酸胀气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阳性菌呈阴性无枯草芽孢菌。自然环境地下水中的粪大肠菌群关键来源于排泄物的环境污染，因而根据测量水里粪大肠菌群的成分，可间接性得到水质受排泄物严重污染的状况，是目前世界各国环保监测单位关键检测新项目之一，是点评水污染水平和清洁卫生的主要指标值，在《地表水环境质量（GB3838—2002）》中，要求Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及Ⅴ类水粪大肠菌群的成分先后≤200、200～2000、2000～10000、10000～20000及20000～40000个/L，在我国地下水体粪大肠菌群成分广泛较高，一部分海域成分乃至超出Ⅴ类水质检测标准。

多管发酵、纸条法和酶底物法是当前中国测量地下水中粪大肠菌群常见的规范方式。多管发酵早在1985年就纳入《生活饮用水标准检验方法（GB5750-85）》，并于2018年公布修订本，是粪大肠菌群测量的传统方式，它做为《水和废水监测分析方法（第四版）》中的建议方式，英国公共卫生服务研究会（APHA）出版发行的《水和废水标准检验方法（20版）》中方式9221E也选用的是多管发酵；纸条法在欧美资本主义国家应用较少，关键在一些发达国家应用，环境保护部在2015年公布了纸条法的规范方式，它做为《水和废水监测分析方法（第四版）》中的建议方式（C类方法）；酶底物法是一种新式酶技术性监测方式 ，已在美、日、韩和欧州众多我国应用,2003年从国外引进在我国，环境保护部在2018年公布了酶底物法的规范方式。三种方式均是粪大肠菌群检验的规范方式，但在方法检出限、现场采样和操作流程等存有差别，文中参考环保企业规范，各自从粪大肠菌群国家标准物质和具体地下水样开展检测分析和比照科学研究，并从检测時间、成本费、自然环境等归纳出各方式的优点和缺点和应用领域，为众多环保监测剖析工作人员依据具体标准和水质采样种类挑选最好方式材料分析测试给予参考与参照。

1试验一部分

1.1实验试剂和原材料

乳清蛋白蛋白胨培养液，EC骨头汤培养液，粪肠子纸条I、II型，粪大肠菌群有证国家标准物质，DST(deflned)MMO-MUG酶底物实验试剂，无菌水，呈阳性菌种：肠子埃希氏菌ATCC25922，呈阴性菌种：产气肠杆菌ATCC13048。

1.2仪器设备和机器设备

取样瓶，防水防火式恒温培养箱：GNP-9160，恒温培养箱：HH.B11.420-135-Ⅱ，髙压灭菌设备：YXQ-LS-100G，程序控制定量分析全自动封口机：2009D,97孔定量分析盘，规范呈阳性色度盘，接种环，1mL容量瓶，试管婴儿：15mm×150mm。

1.3实验方法

多管发酵HJ347.2—2018；纸条法HJ755—2015；酶底物法HJ1001—2018。

2试验結果与探讨

2.1空白试验

空白试验用无菌水做全程序流程空缺测量。(1)多管发酵：初发醇和复发醇的管内均无色调转变 ，达到规范空缺规定；(2)纸条法：塑造后的纸条上无一切微生物菌种生长发育，达到规范空缺规定；(3)酶底物法：塑造后的97孔定量分析盘里无颜色反应，达到H规范空缺规定。

2.2呈阳性及阴性对照

按多管发酵、纸条法和酶底物法三种方式试验需要做好塑造，呈阳性菌种展现阳性反应；呈阴性菌种展现阴性反应。

2.3粪大肠菌群国家标准物质的結果（见表1)

由表1得知，三种方式对粪大肠菌群国家标准物质的六次检测結果均在可接纳范畴（83～312067MPN/L）内；从规范试品检验效果的相对性相对标准偏差看来，多管发酵为3.37%，纸条法为2.44%，酶底物法为1.87%，均达到分别相匹配方式规范中相对性相对标准偏差的规定；从相对偏差看来，多管发酵为3.72%，纸条法为2.6%，酶底物法为3.34%，均达到分别相匹配方式规范中相对偏差的规定。

2.4具体地下水样結果（见表2)

18个不一样自然环境地下水样与此同时用多管发酵、纸条法和酶底物法在同样情况下开展检验，为了更好地使数据信息成标准正态分布，先向信息开展取对数后开展应用统计学剖析，应用SPSS两组开展双样版配对t检验。

由表2数据信息还可以看得出，相关系数r各自为0.983、0.990、0.993，表明三组数据信息关联性不错；每组的t值各自为0.056、0.124、0.247，均低于t0.05(17)=2.110，表明三种方式对同一试品的解析結果无统计学意义上的显著性差异，即多管法、纸条法和酶底物法的研究结论具备一致性。

2.5三种办法的优点和缺点比照（见表3)

由表3得知，从实验过程看来，多管发酵必须 配备培养液并杀菌，开展复发醇，剖析时间48h上下、检测时间长、操作流程繁琐且在杀菌自然环境下检验；纸条法和酶底物法均可及时注射逐渐试验，比较简单，酶底物法注射的劳动量显著比多管和纸条法少许多 ，高效率最大，纸条法对比多管法来讲不必开展复发醇，高效率比多管法高。从实验仪器看来，纸条法只必须 防水防火恒温箱，多管法和酶底物法除开防水防火恒温箱外，均还必须一个机器设备。从资金成本费看来，单独试品的费用多管发酵最少，次之为纸条法，酶底物法成本费最大。

3总结

根据多管发酵、纸条法和酶底物法对规范试品和具体地下水样的试验比照科学研究得知，同一试品三种方式对粪大肠菌群检验結果无应用统计学上显著性差异，其结论具备一致性。他们做为环保等级方式，都各有优点和缺点，可依据不一样的前提和规定选取适宜的方式 。多管发酵和纸条迅速法早已列入《国家地表水环境质量监测网监测任务作业指导书（试行）》的特定方式。

总的来说，多管发酵运用极其普遍，适用水质采样稀释倍数不明的情形和环保监测单位的常用检验；纸条法更适用大量试品的快速检测；酶底物法虽成本费价格昂贵，但使用简易，对检验自然环境并没有特别要求，更适用自然环境安全事故紧急检测。