枸杞子（wolfberry，RW）为茄科枸杞子属绿色植物，是国内传统式名贵中药，从古至今一直把它做为滋补养生佳品，关键包含灵芝多糖，胡罗卜素等各种活力成份。《本草纲目》中记述枸杞子“久服坚骨筋，益身青春不老，耐暑寒”。枸杞子性甘辛平，现代科学研究表明，枸杞子具备滋养肾脏、益肾清目、防衰老等诸多作用。

变老是一种由各种要素造成的细微而又繁杂的生理现象，一般随着着生理作用的衰退乃至衰退，根据变老的自由基学说，变老与人体细胞的空气氧化损害紧密联系。枸杞子做为自然的抗氧剂，其清除自由基和延缓衰老作用获得了普遍的关心。近些年，枸杞子功能食品的分析和研发愈来愈深
入，尤其是枸杞子做为抗氧化食品的开发设计，已变成枸杞子制造业科学研究的网络热点。

美拉德反应是一种在粮食加工环节中普遍出现的非酶褐变反映，关键就是指还原性糖与碳水化合物、蛋白相互之间的繁杂反映。美拉德反应除开能改进食品类感观质量，如颜色和口味外，研究表明，美拉德反应物质中的类黑精具备一定的抗氧化性特点，这为找寻和运用纯天然抗氧剂给予了新的构思。

虽然枸杞子和美拉德反应物质均有清除自由基功效，且具有一定的理论基础，但二者相结合后的物质是不是会出现更强的实际效果，现阶段仍末见报导。因此 ，本试验选用美拉德反应基本原理，制取一种褐变野生黑枸杞新品，以黑腹家蝇为研究目标，深层次研究褐变野生黑枸杞（brownblackwolfberry，BBW）的抗氧化性功效，进而为美拉德反应物质在功能性食品行业的使用给予理论来源。

一、原材料与方式

1、原材料与仪器设备

枸杞子由甘肃早康高新科技有限责任公司给予，黑腹家蝇，由天津市科技学院食品科学与工程学校食用添加剂与功能性调料试验室给予；玉米面粉、发酵粉，购自天津滨海新区明耀商场；无水葡萄糖、琼脂粉，购于天津市春江化工厂有限责任公司；对甲基苯甲酸乙酯，购于北京市鼎国兴盛生物科技企业；没食子酸、芦丁、福林酚试剂，购于北京索莱宝微生物有限责任公司；过氧化氢酶（CAT）检测试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒（测分析）、考马斯亮蓝检测试剂盒、丙二醛（MDA）检测试剂盒，购于南京建成生物技术研究室。

HWS-850智能化恒温恒湿设备恒温箱，宁波海曙赛福试验仪器厂；MultiskanFC酶标仪，英国ThermoFisher企业；UVmini-1240紫外线/由此可见光度计，日本安捷伦仪器分析仪器公司；MyiQ2即时定量PCR仪，英国Bio-Rad公司；冷冻离心机，英国Thermo企业。

2、实验方法：

（1）褐变野生黑枸杞的制取

以宁夏枸杞为原材料，在75%空气湿度和700C标准下置放6d，再在450C的风机烘干箱中干躁定形。干躁风力0.5m/s，干躁時间60min就可以。获得的褐变野生黑枸杞在温开水中泡浸、磨浆、离心式、取上清液，浓缩预留。

（2）褐变野生黑枸杞中黄酮类物质、总酚和褐变指数值的测量

黄酮类类物质的测量参考SZDB/Z349–2019《黄酮类化合物的测定》中紫外线分光仪深度广度法；花青素的测量选用福林酚法；褐变指数值的测量参考Xia等的方式 ，从褐变野生黑枸杞和红枸杞中获取相对分子质量（＞10kDa）的蛋白质黑色素，在420nm处测定的OD值做为OD值。

（3）褐变野生黑枸杞中关键酚类物质的测量

选用高效液相色谱色谱分析。检验标准：离子交换柱：C18（250mm×4.6mm，5μm，）；流动性相A：2%苯甲酸；流动性相B：乙腈；柱温35～40C；进样量20uL；流动速度：0.8mL/min；检验光波长：280nm；探测器为SPD紫外线探测器，用前过0.45μm膜，减压蒸馏，过柱程序流程如表1所显示。

（4）家蝇的塑造

基本培养液：玉米面粉72g，无水葡萄糖72g，琼脂粉6g，发酵粉10g，40mL添加剂（1%对甲基苯甲酸乙酯的75%乙醇溶液），750mL纯净水。给药培养液：在基本培养液基本上各自依照终浓度值3mg/mL、12mg/mL加上相对应使用量的褐变野生黑枸杞和红枸杞。

（5）家蝇使用寿命试验

搜集2d龄的雄、雌虫家蝇各1000只，均值分成5组，各自塑造在带有0、3、12mg/mL褐变野生黑枸杞和红枸杞的培养液内，每一组10管，每管20只，给药使用量的挑选参考刘亚荷等科学研究結果，在反复测试的根基上最后明确。在250⁰C、空气湿度50%的恒温恒湿设备恒温箱中塑造。试验操作过程中，每3d拆换新的培养液，与此同时观查家蝇存活，情况并纪录，直到家蝇所有身亡，并反复试验。最终统计分析家蝇的人均寿命、过半数身亡使用寿命和最大使用寿命（每组最终20只身亡家蝇的日数平均值）。

（6）家蝇亚急性试验

搜集2d龄雄、雌虫家蝇各1000只，每一组200只，选用高效液相色谱色谱分析。检验标准：离子交换柱：C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动性相A：2%苯甲酸；流动性相B：乙腈；柱温35～40⁰C；进样量20uL；流动速度：0.8mL/min；检验光波长：280nm；探测器为SPD紫外线探测器，用前过0.45μm膜，减压蒸馏，塑造25d后，挨饿2h，CO2麻醉剂后导进无培养液的整洁家蝇试管婴儿中，将沾有含30%H2O2的6%葡萄糖水溶液的过滤纸条放进试管婴儿，确保过滤纸条所有侵润但不可能有液态流下来，每2h纪录家蝇死亡率，直到家蝇所有身亡。

（7）家蝇抗抗霉素活测量

搜集2d龄的雌、男性家蝇各1000只，每一组200只，选用高效液相色谱色谱分析。检验标准：离子交换柱：C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动性相A：2%苯甲酸；流动性相B：乙腈；柱温35～40⁰C；进样量20uL；流动速度：0.8mL/min；检验光波长：280nm；探测器为SPD紫外线探测器，用前过0.45μm膜，减压蒸馏，塑造45d后，禁2h，CO2麻醉剂后秤重，-800C预留。家蝇和盐水1∶49（m/m）冰面匀浆，4⁰C，2500r/min离心式，搜集上清液测量蛋白质浓度值，T-SOD、CAT魅力及MDA成分。