由图3得知,随NaCl浓度值的上升,溶菌酶的比魅力先升高后降低,当NaCl浓度值为1moL/L时,所得的溶菌酶的比魅力最大,这时的过柱液浓度值适合获取分离出来溶菌酶。当NaCl浓度值高过1moL/L时,酶的比魅力反倒降低,酶成分转变 却并不大,很有可能因为溶菌酶在浓度较高的溶液中产生蛋白质变性功效造成 。
由图4得知,当过柱時间为60min时,所得的溶菌酶的比魅力最大,伴随着过柱時间再次增加,酶成分提升迟缓,酶比魅力反倒降低,综合性考虑到资金成本费,选中过柱時间为60min。
综上所述,由单要素实验效果得知,阳离子交换最佳加工工艺标准为:鸡蛋清渗沥液环氧树脂之比10∶2.5,pH9.0,NaCl(过柱液)浓度值1mol/L,过柱時间60min。从而,进一步做Box-Behnken实验提升正离子互换法标准,试验设计及結果如表2所显示。
选用DesignExpert8.0.6手机软件实现剖析,如表3所显示。由表3得知,拟合模型的P=0.0014<0.05,表明实体模型与具体情况线性拟合优良。依据上述剖析获知溶菌酶比魅力R1对变量每100mL鸡蛋清渗沥液中环氧树脂使用量(A)、NaCl浓度值(B)、鸡蛋清渗沥液pH值(C)、过柱時间(D)的多元线性回归方程式为:
R1=20866.66-1432.26A 194.18B 486.75C 539.58D-961.62AB-1252.19AC-2929.88AD-21.46BC-2724.86BD 90.11CD-6079.24A2-5995.65B2-3410.58C2-3903.162。
由式子得知,溶菌酶比魅力和4个变量中间具备明显线性相关。线性回归方程的二次项系数较为大,交互项指数中AD、BD的互动指数非常大,表明环氧树脂使用量和过柱時间、NaCl浓度值和过柱时间之间的互动效用非常大,AB、AC的互动指数很大,表明环氧树脂使用量和NaCl浓度值中间、环氧树脂使用量和pH值中间互动效用很大,而BC、CD的互动指数较为小,表明NaCl浓度值和pH值中间、pH值和过柱时间之间的互动效用小。
为了更好地检测方程式的实效性,对测量的溶菌酶的比魅力的分析模型开展方差分析,并对各因素的偏回归系数开展检验。一次项中A的回归系数较明显,P=0.0806,表明鸡蛋清环氧树脂核对获取的溶菌酶比魅力有较明显功效。二次项中A、B、C、D的偏回归系数均做到极明显水准。交互项AD、BD回归系数较其他要素明显,表明环氧树脂使用量和过柱時间、NaCl浓度值和过柱时间之间的交互项对溶菌酶比魅力危害比较明显。
为了更好地获得最大的溶菌酶比魅力,吸咐和过柱的各标准必须 适合的交叉式挑选。响应面图可直接体现各要素及配对t检验对酶魅力的危害,故取3项显著性差异较高的交互项制做响应面图,依据图5~7的Box-Behnken提升实验线性拟合回应斜面图和方差分析获知,对溶菌酶比魅力危害尺寸次序为AD>BD>AC。
对二次线性回归方程求一阶偏导,当响应值R1(溶菌酶比魅力)为最高值时,各因素水准为每100mL鸡蛋清渗沥液中,环氧树脂使用量(A)为24.20mL、NaCl浓度值(B)为1.00mol/L、鸡蛋清渗沥液pH值(C)为9.10、过柱時间(D)为62.61min。这时基础理论预测分析溶菌酶比魅力为21041.1U/mg。
对所获取的阳离子交换各最佳标准做平行面认证实验,反复5次,如表4所显示,获得的溶菌酶比魅力为20509.58U/mg,与标准偏差贴近。
申明:文中常用照片、文本来源于《中国食品报》,著作权归原作全部。