6、AFB₁最佳溶解标准的明确

由表4得知，二次线性回归方程的实体模型极明显，且方程式的回归系数R²为0.8992，因而方程式的拟合程度高，可以恰当体现AFB₁溶解率与孵育時间、孵育溫度和酶魅力中间的关联，根据DesignExpertv8.0.6手机软件剖析AFB₁较大 溶解率相匹配的反映情况为孵育時间15.030h、孵育溫度33.985℃、酶魅力2.107U，估计值为91.866%，考虑到操作过程，相匹配的孵育時间15h、孵育溫度34℃、酶魅力2U，获得的AFB₁溶解率是91.08%，说明AFB₁溶解率与估计值基本上符合，表明该实体模型能够预测分析AFB₁较大 溶解率。

7、AFB₁溶解物质的总离子流色谱仪

如图所示7所显示，AFB₁经漆酶溶解后检验到4个新的色谱仪峰，由峰形和分离度可看得出，各物质分离出来实际效果不错，且由保存期不一样推断溶解物质不一样。依据AFB₁和溶解物质的保存期分辨5种化学物质的旋光性尺寸为A＞B＞C＞AFB₁＞D。

8、AFB₁溶解物质的化学式及结构特征

为进一步明确4种溶解物质的化学结构式，运用Q-TOF-MS开展剖析。在所有反映系统中，AFB₁只含C、H、O3元素表，酶的本质为蛋白，运用酶溶解则很有可能引进N原素。运用收集到的各溶解物质的质谱分析数据信息，预测分析各物质很有可能的元素组成和化学式，如表5所显示。

AFB₁关键由4个不一样的溶解功效结构域:1）香豆素内酯环不稳定，在外部标准下能脱羰基）能与核苷酸、蛋白等融合的咪唑环烃基和H₂O、H等产生加成反应。3）环戊烯酮环根据加成反应、取代反应危害AFB1的毒副作用。4）苯环上的-0CH₃能够与-OH、H、-CHO产生取代反应。与此同时，AFB₁的一部分溶解物质中间还可以互相转换。如图所示8A所显示，溶解物质A在撞击中造成[M H] 为m/z279.0932的磷酸激酶正离子，依据高分辨质谱結果线性拟合的化学结构式为C₁₆H₂₂O₄，与此同时造成[M H] 为m/z201.0465、149.0236、121.0311的特点残片正离子。依据二级质谱分析特点正离子m/z149，并运用Scifinder和Reaxy数据库查询查找。由溶解物质A的特点残片正离子[M H] 为m/z149.0236推断的结构特征与Samuel等分析出的Pseudomonasputida溶解AFB₁获得的AFD3物质构造一致，而且经试验认证该化学物质对Hela体细胞的毒副作用远低于AFB₁。如图所示8B所显示，溶解物质B在撞击中造成[M H] 为m/z245.1282的磷酸激酶正离子，依据高分辨质谱結果线性拟合的化学结构式为C₁₄H₁₆N₂O₂，与此同时造成[M H] 为m/z217.1332、120.0811、154.0735、70.0680的特点残片正离子。依据二级质谱分析特点正离子m/z271，推断该化学物质构造中存有一个羰基，并运用Scifinder和Reaxy数据库查询查找。如图所示8C所显示，溶解物质A在撞击中造成[M H] 为m/z197.1145的磷酸激酶正离子，依据高分辨质谱結果线性拟合的化学结构式为C₇H₁₂N₆O₁与此同时造成[M H] 为m/z70.0678的特点残片正离子。依据二级质谱分析特点正离子，推断该化学物质中有吡咯烷构造，并运用Scifinder和Reaxy数据库查询查找。如图所示8D所显示，溶解物质C在撞击中造成[M H] 为m/z415.2427的磷酸激酶正离子，依据高分辨质谱結果线性拟合的化学结构式为C₂₄H₃₀O₆，与此同时造成[M H] 为m/z397.1455、109.0863的特点残片正离子。依据二级质谱分析特点正离子m/z397和m/z109，推断该化学物质构造中存有一个甲基和苯甲醇结构单元，并运用Scifinder和Reaxy数据库查询查找。AFB₁经漆酶溶解后的各物质构造见图9。

有研究表明持续损害-CO是AFB₁的具体的破裂方式，苯环上的叔丁基也会产生二甲苯和工业甲醇遗失。依据溶解方法的不一样，AFB₁可产生甲基化、环空气氧化、复原和脱氢等反映。AFB₁的生物溶解关键涉及到内毒素咪唑环或香豆素内酯环构造的装饰，这2种构造是AFB₁具备高致癌物质和高毒素的首要缘故。WangJianqiao等初次报导锰乳酸脱氢酶能够根据将AFB₁转换为AFB₁-8，9-二氢二醇而合理除去AFB₁的诱变活力。LiJianlong等运用抗盐CandidaversatilisCGMCC3790溶解AFB₁获得4种溶解物质，推断AFB₁有2种溶解方式，一种是内酯环和苯环被水解反应，另一种是利用加氢裂化毁坏内酯环的酯键和醛基。Samuel等19发觉AFB₁的咪唑环、内酯羰基和环戊烯酮环被Pseudomonasputida装饰、毁坏而转换成不一样构造的化学物质。

Afsharmanesh等22发觉F₄₂₀H₂还原酶能够催化反应α-和β-不饱和脂肪酯一部分的烃基复原，BacC空气氧化还原酶能够催化反应香豆素内酯环烃基水解反应造成羧基，接着产生脱羧基反映转化成物质。

酶溶解管理体系繁杂，漆酶在所有系统中起到催化反应，裂化成包括-NH2、R-NH2等官能团异构的小分子多肽、碳水化合物等化学物质，能够与AFB₁的活力结构域产生加持、替代等一系列反映，因而AFB₁的溶解途径比较繁杂。本试验获得的4种溶解物质均没有咪唑环烃基、香豆素内酯环和环戊酮烯环，且含有烃基总数均低于AFB₁很有可能在AFB₁分子结构的以上毒副作用位置根据加持、替代或氧化还原反应造成了新的碳键。溶解物质A（C₁₆H₂₂O₄）比AFB₁少一个-CO₂，多10个H，推断有可能为AFB₁遗失-CO后产生脱羰基反映，构造中的烃基与H分子产生加持。溶解物质B（C₇H₁₂N₆O）和C（C₁₄H₁₆N₂O₂）均带有N原素，可能是管理体系中的含N小分子水化学物质参加反映，且发觉相仿的裂化残片，推断有可能为AFB1产生持续的-CO遗失后，与H₂O和-NH₂产生加持和取代反应，转化成物质C和D。推断溶解物质D（C₂₄H₃₀O₆）的转化成方式为咪唑环烃基产生加成反应而破裂，持续遗失-CO，烃基与H₂O和H产生加成反应。

AFs的毒素和致癌物质体制早已被普遍科学研究，关键与二氢咪唑环和香豆素构造相关，根据对本科学研究溶解物质构造的剖析，发觉咪唑环烃基和香豆素内酯环均被毁坏，因而推断漆酶溶解AFB₁获得的物质毒副作用明显小于亲本内毒素。也是有研究表明AFB₁经漆酶解决后，咪唑环烃基或内酯环裂化，物质的莹光性和诱变性变弱，且未监测到与AFB₁相仿的构造类似物。可是因为漆酶的来源、溶解标准存有差异，也有可能导致减价物质的毒副作用存有差别，必须 开展身体之外细胞毒性、基因遗传毒副作用试验及其身体临床实验进一步认证，评定溶解物质的安全系数。

本分析挑选与栓菌漆酶lac3遗传基因开放阅读框最大的3KW7做为模版开展同宗模建，将AFB₁对收到漆酶的活性位置，数据显示漆酶与AFB₁能够相互影响，共价键是重要相互作用力，说明漆酶可用以AFs的溶解。根据具体的溶解试验认证，响应面提升得到AFB₁溶解率最佳的情况为应時间15h，孵育溫度34℃，酶魅力2U，溶解率可以达到91.08%。在这里前提下运用UPLC-Q-TOF-MS剖析AFB₁溶解物质构造，发现4个关键溶解物质，依据其二级质谱分析信息内容和精准分子质量，推断出溶解物质的化学式各自为C₁₆H₂₂O₄、C₁₄H₁₆N₂O₂、C₇H₁₂N₆O和C₂₄H₃₀O₆。

本试验只对于最佳溶解情况下物质的转化成方式及构造开展分析，针对不一样溶解情况下物质的差异未开展讨论，蛋白质酶的来源及功效時间、溫度和酶魅力等外部要素也许会危害溶解方式及物质构造，需进一步开展深入分析科学研究。海外对黄曲霉微生物树脂吸附的分析较多聚集在乳酸菌饮料、芽孢杆菌和一些细菌中如树形结构指孢霉（Dactyliumdendroide）、内寄生曲霉（Aspergillusparasiticus）、糙皮耳尖（Pleurotusostreatus）、茎点霉（Phomasp）、白腐菌掉色栓菌（Trametesversicolor）等。对乳酸菌饮料的科学研究大部分觉得乳酸菌饮料溶解AFB₁是根据微生物吸咐功效，Eshelli等科学研究了芽孢杆菌对AFB₁溶解推论其溶解方式很有可能和油酸及糖酵解途径正中间产品的积累相关，而对细菌的研究表明其对AFB₁的溶解大部分为降解，关键利用微生物菌种代谢胰蛋白酶的酶促反应；如左文凯、杨文华等各自从细菌假蜜环菌（Armillariellatabescens）、黏病菌（Myxococcusfulvus）、施氏假单胞菌（Pseudomonasstutzeri）F4中获得了能溶解AFs的胰蛋白酶，前二者还试着了其在大肠埃希菌和毕赤酵母中实现表述，并开展一些酶学基本上特性的剖析。总体来说，现阶段早已发觉能使AFs成分减少包含病菌、细菌和酵母以内的大概有上千百种微生物菌种，可是大部分的分析关键注重在AFs溶解菌种的挑选和粗提液溶解功能的剖析上，针对不一样微生物菌种来源于的胰蛋白酶的特性、构造和底物功效方式、溶解原理、物质构造及溶解物质毒副作用的认知仍欠缺进一步的探讨与讨论。这很有可能与微生物菌种产酶量低，分离纯化艰难，酶特性不稳定及功效标准严苛等因素相关。但伴随着细胞生物学、生物学、基因工程技术及酶工程等技术应用的發展完善，大家对酶的了解愈来愈清楚，资产重组载体构建、异源表述、电子自旋共震、同宗模建、分子模拟、分子结构分析等方法的创建使以上研究过程中的短板很有可能得到提升，有越多的方式和方式分析难题身后的实质。