一、目地和规定

①根据本试验加重对凯氏定氮法测量基本原理的了解和了解。

②根据本试验把握凯氏定氮法中试品消化吸收、水蒸气蒸馏、消化吸收等专业技能的实际操作。

二、基本原理

本试验是运用蛋白是中氮的有机物，当食品类与盐酸和金属催化剂一同加温消化吸收时，使蛋白质分解，溶解的氮与盐酸融合转化成硫酸铵。随后再脱灰水蒸气蒸馏使氨分散，用硼酸消化吸收后再以硫酸标液滴定管，最终依据酸的使用量乘于计算指数，即是蛋白质含量。

三、仪器设备

①500mL凯氏蒸发皿

②定氮蒸馏装置

四、实验试剂

①硫代硫酸钠

②硫酸铵

③盐酸

④40g／L硼酸洗液

⑤混和显色剂

⑥400g／L氢氧化钠溶液水溶液

⑦0.1000mol／L硫酸标液

五、实验步骤

1、试品的消化吸收

将大豆破碎，过40目筛，搅拌后精确称量黄豆面粉0.30g，当心移进100mL干躁的凯氏蒸发皿中（勿粘附在瓶内壁），添加0.2g硫代硫酸钠、3g硫酸铵及5mL盐酸（1克试品加盐酸15mL），稍混匀后，将瓶以45^°斜支有石棉网的加热炉上，先以文火迟缓加温（烧开的泡沫塑料不超过瓶肚的2／3），待內容物全都碳化，泡沫塑料彻底停下后，提升火力点，并维持瓶里液态微沸，直到液态呈深蓝色回应全透明后，再再次加温0.5h，进行消化吸收。

待消化酶冷至常温后，用纯净水整洁地转到100mL容量瓶中，并且用纯净水滴定剂，混匀，（消化酶在临用前再稀释液滴定剂）。

2、水蒸气蒸馏与消化吸收

联接好少量定氮蒸馏装置，于水蒸汽产生瓶里盛水至2／3容量处，加甲基橙显色剂数滴及盐酸数mL，以保证水偏酸，添加数粒玻璃弹珠，加温烧开水蒸汽产生瓶里的水。查验设备的密封性。

在接受瓶里添加25mL 40g／L硼酸及2滴混和显色剂，将冷凝器下方插进液位下列。精确量撤销化封闭液10mL经布氏漏斗口添加反映管中，用少许纯净水清洗布氏漏斗。经布氏漏斗再添加10mL 40g／L氢氧化钠溶液水溶液使其呈强偏碱，马上夹好布氏漏斗夹，并加少许水于气相布氏漏斗中密封，防止漏汽。夹持废水排出口处的螺旋式夹，开展水蒸气蒸馏。水蒸气蒸馏至冷凝器下端消化吸收液变成翠绿色逐渐记时，再次水蒸气蒸馏3min后，将冷凝器顶尖提离液位再水蒸气蒸馏1min，用纯净水清洗冷凝器顶尖后终止水蒸气蒸馏。

3、滴定管

消化吸收液用0.1000mol／L硫酸标液滴定管至水溶液发生微鲜红色在30s内不消退即是做到滴定终点。

4、试剂空白

不用试件，按以上实际操作开展试剂空白。

六、結果解决

式中：ω——蛋白的质量浓度，％

c——HCl规范溶液的浓度，mol／L

V₁——滴定管试品消化吸收液时耗费硫酸标液容积，mL

V₂——滴定管空缺消化吸收液时耗费硫酸标液容积，mL

m——黄豆面粉的品质，g

M——氮的摩尔质量，14.01g／mol

F——大豆的蛋白质含量计算指数（5.71）

七、表明及常见问题

①消化过程应留意旋转凯氏蒸发皿，运用冷疑酸液将粘附在瓶内壁的炭粒冲下去，以促消化彻底。

②试品含人体脂肪或糖较多时，易形成泡沫塑料，可添加小量辛醇或液体石蜡，或甲基硅油有机硅消泡剂，避免其外溢瓶外，并留意合理操纵热原抗压强度。

③硫代硫酸钠具有催化反应，加快氧化分解。与此同时也是水蒸气蒸馏时试品液脱灰的显色剂，若所施加碱量不够，溶解液展现深蓝色不转化成碱式硫酸铜沉积，需再提升氢氧化钠溶液使用量。

④水蒸气蒸馏全过程应留意连接处有没有松漏状况，水蒸气蒸馏结束，先将水蒸气蒸馏出入口离去液位，再次水蒸气蒸馏1min，将粘附在顶尖的吸附液彻底洗入消化吸收瓶里，再将消化吸收瓶移走，最终断电，决不能先断电，不然消化吸收液将产生反吸状况。