本实验中,在多糖提取物不被显著降解的条件下去除结合的蛋白质,以提高多糖的质量分数是十分必要的。1.3.1中得到的DAMP的多糖质量分数为(53±0.58)%,蛋白质质量分数为(39.09±0.88)%。经4种蛋白质脱除方式处理后,多糖质量分数、蛋白质脱除率和多糖损失率见表1。多糖质量分数由高到低分别为:TCA法>稀碱法>碱酶酶解法>GDL法。其中,TCA组多糖质量分数显著高于其他3组。蛋白质脱除率及多糖损失率由高至低依次为:TCA法>稀碱法>碱酶法>GDL法。结合多糖质量分数、蛋白脱除率与多糖损失率分析可得,TCA法脱蛋白质最有效,但多糖损失严重;DAMP经稀碱法与酶解法处理后,多糖质量分数无显著差别,但稀碱组蛋白质脱除率及多糖损失率显著高于酶解组;经GDL法处理后,多糖质量分数及蛋白质脱除率均显著低于其他方式,多糖损失率也最少。
由表2可知,碱酶组多糖含有Man、GlcN、GalUA、Glc、Gal、Am;稀碱组多糖含有GlcN、Glc、Gal;TCA组多糖含有GlcN、GalUA、Glc;GDL组多糖含有Man、GlcN、Rha、GalUA、Glc。不同蛋白质脱除方式所得多糖的单糖组成略有差别,稀碱组和碱酶组多糖中的半乳糖醛酸在碱性环境中生成半乳糖,而TCA法和GDL法多糖中检测到半乳糖醛酸,未检测到半乳糖。各组数据中,葡萄糖质量分数均最高。据报道,海湾扇贝多糖组分为中性多糖和酸性多糖,与本实验结果一致。
为了明确不同脱除方式处理的扇贝多糖中残留蛋白质的情况,以及这些蛋白质与抗氧化活性之间的关系,对4种方式脱蛋白后的干贝多糖进行了氨基酸组成分析,结果显示:干贝多糖中的总氨基酸质量分数为15~160mg/g,碱酶组和稀碱组均检测山16种氨基酸,TCA组和GDL组均检测出14种氨基酸,可见氨基酸种类齐全。由表4可知,碱酶组的亲水氨基酸及极性氨基酸质量分数较高,非极性氨基酸及必需氨基酸质量分数较低,疏水性氨基酸质量分数最低;稀碱组的疏水氨基酸质量分数较低,其他4种氨基酸质量分数均最低;TCA组的疏水性氨基酸、非极性氨基酸与必需氨基酸质量分数最高,亲水性氨基酸与极性氨基酸质量分数较低;GDL组的亲水性氨基酸和极性氨基酸质量分数最高,疏水性氨基酸、非极性氨基和必需氨基酸质量分数较高。
由图1可知,在氢氧化钠的浓度为0~0.1mol/L时,对照组(刚果红)的最大吸收波长逐渐减小,GDL组和碱酶组多糖与刚果红结合生成的络合物的最大吸收波长随NaOH浓度的增大红移明显发生,表明GDL组和碱酶组多糖存在三螺旋结构,TCA组和稀碱组多糖不具有三螺旋结构,可能是DAMP在碱液、酸液处理过程中,维持稳定三螺旋结构作用的分子内、分子间氢键受到破坏,导致三螺旋结构变性。
相关链接:氨基酸,多糖,氢氧化钠,半乳糖醛酸
声明:本文所用图片、文字来源《食品与生物技术学报》,版权归原作者所有。如涉及作品内容、版权等问题,请与本网联系