防腐剂是为了防止食品因微生物等引起的腐败变质所添加的,使食品在一般的自然环境中具有一定的保存期。但目前食品添加剂超量、超范围使用的现象很多,苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是使用最广泛的防腐剂。
酱油是中国传统的调味品,生产中主要用到的添加剂为:苯甲酸钠,山梨酸,对羟基苯甲酸酯类及其钠盐,在GB2760-2014中规定的最大使用量依次是1.0g/kg、1.0g/kg、0.25g/kg。对于纯牛奶,根据GB2760—2014要求为不得检出,蛋白饮料中苯甲酸的最大使用量是1.0g/kg;饮料类山梨酸最大使用量是0.5g/kg,对羟基苯甲酸酯类是0.25g/kg。
糠醛、5-甲基糠醛在GB2760-2014中规定为允许使用的食品用香料,但在附录表B.1不得添加食品用香料、香精的食品名单中有牛奶、蜂蜜,所以为不得检出。同时含糖的食品在加工和贮存过程中,会发生糖的热降解反应和美拉德反应,这两个反应均会产生5-羟甲基糠醛(5-HMF),进而热分解产生糠醛和5-甲基糠醛。糠醛类物质在体内不断积累会引起中毒。
目前测定这5类防腐剂和3类糠醛类物质含量的方法主要有气相色谱法、气相色谱-质谱法、高效液相色谱法和液相色谱-质谱法。GB/T18932.18-2003即采用液相色谱/紫外检测法测定蜂蜜中的羟甲基糠醛含量,并制定了限量要求。而目前同时测定这6类食品中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、糠醛、5-甲基糠醛和5-羟甲基糠醛含量的方法尚未见报道。因而建立一种快速、方便、经济的检测方法,有利于保障人们的消费安全。本文采用气相色谱-串联质谱联用快速测定酱油、牛奶、饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜中糠醛类物质和防腐剂类物质,对样品的前处理方法及GC-MS/MS分析条件进行优化,GC-MS/MS多反应监测模式(MRM)进行测定,能够满足酱油、牛奶、饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜中3种糠醛类物质和5种防腐剂的检测。
标准品:糠醛(CAS号:98-01-1)、5-甲基糠醛(CAS号:620-02-0)、5-羟甲基糠醛(CAS号:67-47-0)(百灵威科技有限公司,纯度≥98%);苯甲酸(CAS号:65-85-0)、山梨酸(CAS号:110-44-1)、对羟基苯甲酸甲酯(CAS号:99-76-3)、对羟基苯甲酸乙酯(CAS号:120-47-8)、对羟基苯甲酸丙酯(CAS号:94-13-3)(德国sigma公司,纯度≥99%);乙腈、丙酮(色谱纯,美国TIDE公司);正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯(分析纯,购买于华东医药有限公司),无水硫酸镁、无水硫酸钠(分析纯,购买于华东医药有限公司);实验用水为蒸馏水。
BmkercP450-300三重四极杆质谱仪(C-MS/MS);高速离心机(HealForce公司)。
①气相色谱测定气相色谱条件:色谱柱:WAX-58(25m×0.32mm×1.2μm)弹性石英毛细管柱,进样口温度230℃;柱升温程序:初温50℃保持0.5min,以25℃/min的速率升温到250℃保持11.5min,共20min;载气:高纯氦气(99.999%),柱流量1.0mL/min恒定流量模式;进样量:1.0μL。
质谱条件:电子轰击源(EI),离子源温度230℃;传输线温度250℃;腔体温度40℃;溶剂延时4.5min;分段扫描。碰撞气:氩气,压力为0.2Pa(1.5mT0rr);碰撞能量:针对每种化合物进行优化;8种物质的定性、定量离子和多反应监测(MRM)参数见表1。
称取试样2g(饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜,精确至0.01g)于20mL刻度磨口试管中(其中蜂蜜需要加60℃温水5.0mL溶解),加入10.0mL乙腈,加少量无水硫酸镁,充分振荡摇匀2min,于600r/min离心3min,取上清液过0.45μm有机相滤膜后,进行GC-MS/MS分析。
称取试样2g(酱油、牛奶,精确至0.01g)于50mL离心管中,加入10.0mL乙腈,250r/min涡旋,振荡1min,超声波提取20min后,加入0.5g氯化钠,0.5g无水硫酸镁,2500r/min涡旋振荡30s,8000r/min离心5min取上清液待净化;取上述待净化液5ml,加入C180.05g,PSA0.05g,无水硫酸镁0.1g,2500r/min涡旋振荡30s,8000r/min离心2min,上清液过0.45μm有机相滤膜过滤后,进行GC-MS/MS分析。
将糠醛、5-甲基糠醛、5-羟甲基糠醛、苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯用乙腈配制成浓度为2000mg/L的溶液,于4℃保存。
将储备液配制成0.01、0.02、0.05、0.1、0.5、1、2、5、10和50mg/L的标准液,进样分析,以保留时间定性,以峰面积定量。用外标法绘制出浓度/峰面积工作曲线做标准曲线。
①提取溶剂的选择选用乙酸乙酯、正己烷、乙腈、二氯甲烷、丙酮5种不同极性的溶剂对8种化合物进行萃取实验。按称取试样2g(酱油、牛奶,精确至0.01g)于50mL离心管中,加入10.0mL乙腈,250r/min涡旋,振荡1min,超声波提取20min后,加入0.5g氯化钠,0.5g无水硫酸镁,2500r/min涡旋振荡30s,8000r/min离心5min取上清液待净化;取上述待净化液5ml,加入C180.05g,PSA0.05g,无水硫酸镁0.1g,2500r/min涡旋振荡30s,8000r/min离心2min,上清液过0.45μm有机相滤膜过滤后,进行GC-MS/MS分析。结果表明,采用乙腈作为提取溶剂时的回收率更高,最终采用乙腈作为提取溶剂,回收率见表2。
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