防腐剂是为了防止食品因微生物等引起的腐败变质所添加的，使食品在一般的自然环境中具有一定的保存期。但目前食品添加剂超量、超范围使用的现象很多，苯甲酸、山梨酸和对羟基苯甲酸酯类是使用最广泛的防腐剂。

酱油是中国传统的调味品，生产中主要用到的添加剂为：苯甲酸钠，山梨酸，对羟基苯甲酸酯类及其钠盐，在GB2760-2014中规定的最大使用量依次是1.0g/kg、1.0g/kg、0.25g/kg。对于纯牛奶，根据GB2760—2014要求为不得检出，蛋白饮料中苯甲酸的最大使用量是1.0g/kg；饮料类山梨酸最大使用量是0.5g/kg，对羟基苯甲酸酯类是0.25g/kg。

糠醛、5-甲基糠醛在GB2760-2014中规定为允许使用的食品用香料，但在附录表B.1不得添加食品用香料、香精的食品名单中有牛奶、蜂蜜，所以为不得检出。同时含糖的食品在加工和贮存过程中，会发生糖的热降解反应和美拉德反应，这两个反应均会产生5-羟甲基糠醛(5-HMF)，进而热分解产生糠醛和5-甲基糠醛。糠醛类物质在体内不断积累会引起中毒。

目前测定这5类防腐剂和3类糠醛类物质含量的方法主要有气相色谱法、气相色谱-质谱法、高效液相色谱法和液相色谱-质谱法。GB/T18932.18-2003即采用液相色谱/紫外检测法测定蜂蜜中的羟甲基糠醛含量，并制定了限量要求。而目前同时测定这6类食品中苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、糠醛、5-甲基糠醛和5-羟甲基糠醛含量的方法尚未见报道。因而建立一种快速、方便、经济的检测方法，有利于保障人们的消费安全。本文采用气相色谱-串联质谱联用快速测定酱油、牛奶、饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜中糠醛类物质和防腐剂类物质，对样品的前处理方法及GC-MS/MS分析条件进行优化，GC-MS/MS多反应监测模式(MRM)进行测定，能够满足酱油、牛奶、饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜中3种糠醛类物质和5种防腐剂的检测。

一、材料与方法

1、材料与试剂

标准品：糠醛(CAS号：98-01-1)、5-甲基糠醛(CAS号：620-02-0)、5-羟甲基糠醛(CAS号：67-47-0)(百灵威科技有限公司，纯度≥98％)；苯甲酸(CAS号：65-85-0)、山梨酸(CAS号：110-44-1)、对羟基苯甲酸甲酯(CAS号：99-76-3)、对羟基苯甲酸乙酯(CAS号：120-47-8)、对羟基苯甲酸丙酯(CAS号：94-13-3)(德国sigma公司，纯度≥99％)；乙腈、丙酮(色谱纯，美国TIDE公司)；正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯(分析纯，购买于华东医药有限公司)，无水硫酸镁、无水硫酸钠(分析纯，购买于华东医药有限公司)；实验用水为蒸馏水。

2、仪器与设备

BmkercP450-300三重四极杆质谱仪(C-MS/MS)；高速离心机(HealForce公司)。

3、方法

（1）色谱条件

①气相色谱测定气相色谱条件：色谱柱：WAX-58(25m×0.32mm×1.2μm)弹性石英毛细管柱，进样口温度230℃；柱升温程序：初温50℃保持0.5min，以25℃/min的速率升温到250℃保持11.5min，共20min；载气：高纯氦气(99.999％)，柱流量1.0mL/min恒定流量模式；进样量：1.0μL。

质谱条件：电子轰击源(EI)，离子源温度230℃；传输线温度250℃；腔体温度40℃；溶剂延时4.5min；分段扫描。碰撞气：氩气，压力为0.2Pa(1.5mT0rr)；碰撞能量：针对每种化合物进行优化；8种物质的定性、定量离子和多反应监测(MRM)参数见表1。

4、样品前处理

（1）饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜

称取试样2g(饮料、黄酒、啤酒、蜂蜜，精确至0.01g)于20mL刻度磨口试管中(其中蜂蜜需要加60℃温水5.0mL溶解)，加入10.0mL乙腈，加少量无水硫酸镁，充分振荡摇匀2min，于600r/min离心3min，取上清液过0.45μm有机相滤膜后，进行GC-MS/MS分析。

（2）酱油、牛奶

称取试样2g(酱油、牛奶，精确至0.01g)于50mL离心管中，加入10.0mL乙腈，250r/min涡旋，振荡1min，超声波提取20min后，加入0.5g氯化钠，0.5g无水硫酸镁，2500r/min涡旋振荡30s，8000r/min离心5min取上清液待净化;取上述待净化液5ml，加入C180.05g，PSA0.05g，无水硫酸镁0.1g，2500r/min涡旋振荡30s，8000r/min离心2min，上清液过0.45μm有机相滤膜过滤后，进行GC-MS/MS分析。

5、标准曲线的绘制

（1）标准储备液

将糠醛、5-甲基糠醛、5-羟甲基糠醛、苯甲酸、山梨酸、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯用乙腈配制成浓度为2000mg/L的溶液，于4℃保存。

（2）标准液

将储备液配制成0.01、0.02、0.05、0.1、0.5、1、2、5、10和50mg/L的标准液，进样分析，以保留时间定性，以峰面积定量。用外标法绘制出浓度/峰面积工作曲线做标准曲线。

二、结果与讨论

1、实验条件的优化

（1）样品前处理条件的优化

①提取溶剂的选择选用乙酸乙酯、正己烷、乙腈、二氯甲烷、丙酮5种不同极性的溶剂对8种化合物进行萃取实验。按称取试样2g(酱油、牛奶，精确至0.01g)于50mL离心管中，加入10.0mL乙腈，250r/min涡旋，振荡1min，超声波提取20min后，加入0.5g氯化钠，0.5g无水硫酸镁，2500r/min涡旋振荡30s，8000r/min离心5min取上清液待净化;取上述待净化液5ml，加入C180.05g，PSA0.05g，无水硫酸镁0.1g，2500r/min涡旋振荡30s，8000r/min离心2min，上清液过0.45μm有机相滤膜过滤后，进行GC-MS/MS分析。结果表明，采用乙腈作为提取溶剂时的回收率更高，最终采用乙腈作为提取溶剂，回收率见表2。

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