建立水稻中二氯喹啉酸及其代谢物二氯喹啉酸甲酯残留的QuEChERS-HPLC-MS/MS分析方法，将该方法运用到不同地区水稻样品的检测。

二氯喹啉酸和二氯喹啉酸甲酯分别经甲醇和乙腈提取，C18、PSA和GCB净化，C18色谱柱分离，电喷雾离子源（ESI+），多反应监测模式（MRM）下分析。在0.05、0.1、1mg/kg质量分数添加水平下，二氯喹啉酸平均添加回收率为83%～96%,RSD为0.4%～8.7%。在0.01、0.1、1mg/kg添加水平下，二氯喹啉酸甲酯平均添加回收率为79%～106%,RSD为0.2%～14.4%。

通过检测1年12地的水稻样品，二氯喹啉酸在水稻中的残留量为0.05～0.48mg/kg，二氯喹啉酸甲酯的残留量均小于0.01mg/kg，低于国家标准中规定的二氯喹啉酸在水稻上的最大残留限量（1mg/kg）。该方法简单快速准确，适合于水稻中二氯喹啉酸及其代谢物二氯喹啉酸甲酯的残留检测。

二氯喹啉酸（quinclorac）是喹啉羧酸类激素型特效选择性除草剂，属于典型的长残留农药，在植物体内、土壤和水中都有残留，施药后残效期长，影响了后茬作物的生长，对部分作物有致畸作用。水稻作为世界上最重要的粮食作物之一，是世界一半以上人口的主食，且二氯喹啉酸是中国水稻使用量排名前十的除草剂，所以水稻中二氯喹啉酸的残留问题得到人们的日益重视。

美国、欧盟和日本规定二氯喹啉酸在水稻上的最大残留限量（MRL）为5mg/kg，我国规定二氯喹啉酸在水稻上的MRL值为1mg/kg，并未规定其代谢物的残留限量。目前针对二氯喹啉酸代谢途径的研究很少，在对于微生物降解研究中发现分枝杆菌（Mycobacteriumsp.）F4通过脱氯的方式或羧基甲基化可以产生甲酯化合物，二氯喹啉酸甲酯（quincloracmethylester）作为二氯喹啉酸在植物体内的代谢产物毒性略低于母体[二氯喹啉酸LD50=2680mg/kgb.w.（鼠急性经口），二氯喹啉酸甲酯LD50>2000mg/kgb.w.（鼠急性经口）]，但由于二氯喹啉酸甲酯在植物体内可以转化为二氯喹啉酸，所以二氯喹啉酸代谢物的残留检测问题不容忽视。结构式见图1。

目前检测二氯喹啉酸的方法有液相色谱法、气相色谱法和液质联用法。黄思琦等建立的液相色谱-串联质谱法测定模拟自然条件下稻田环境中的水、土壤和水稻植株中二氯喹啉酸的残留，采用酸化乙腈作为提取溶剂，分散固相萃取净化，操作简单，灵敏度高，但并未关注代谢物二氯喹啉酸甲酯的残留检测；关于二氯喹啉酸及其代谢物的检测方法，王一茹等利用气相色谱的方法同时检测了二氯喹啉酸和代谢物二氯喹啉酸甲酯的残留，但采用了甲基化试剂（重氮甲烷）转化为甲酯进行检测，该方法前处理复杂，溶剂用量大，分析时间长。

QuEChERS前处理方法是相较于传统前处理方法更节省溶剂、回收率高、处理时间短，近年来常用的前处理技术，可以有效的缩短净化时间，减少净化剂的使用，节省试验成本。本试验旨在建立一种QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法，可同时检测水稻中的二氯喹啉酸及其代谢物的残留，优化检测方法，节约成本，提高前处理的效率。并运用到1年12地田间试验样品，分析二氯喹啉酸及其代谢物在不同地区水稻中的残留，验证该方法的实用性。

1材料与方法

1.1试验材料

99.2%二氯喹啉酸标准品，99.0%二氯喹啉酸甲酯标准品，十八烷基硅烷键合胶（C18）、N-丙基乙二基（PSA）、石墨化碳黑（GCB）、色谱纯乙腈、甲醇和甲酸，分析纯无水硫酸镁和氯化钠，50%二氯喹啉酸可溶粉剂。

1.2仪器设备

Agilent1290-6460液相色谱串联三重四级杆质谱仪和MassHunter工作站软件，超纯水仪，万分之一天平，涡旋振荡器，SL-200型高速多功能粉碎机，高速冷冻离心机，LTJM-2099型精米机。

1.3最终残留田间试验设计

最终残留田间试验于2018年在黑龙江、辽宁、安徽、江苏等12地进行，试验地信息见表1。按农作物中农药残留试验准则要求设试验小区，试验设置1个处理小区和1个对照小区。每个小区面积不小于100m2，小区之间设置保护行，每个处理重复3次。

试验区：以田间推荐最高施药剂量375ga.i./hm2（制剂用药量750g/hm2），水稻移栽后7～15d，稗草2～3叶期，茎叶喷雾，施药1次。水稻收获时采集水稻植株和稻穗样品约1kg,（-20±2）℃下保存，待测。

对照区：设置不施药空白对照区，喷施等量的清水，采集水稻植株和稻穗作为空白样品。

1.4残留分析方法

1.4.1样品前处理

稻穗经精米机脱壳分为糙米和稻壳2部分，稻秆植株剪为小段，分别用高速粉碎机粉碎。

二氯喹啉酸：准确称取5g粉碎样品（糙米、稻壳和稻秆）于50mL离心管中，加入10mL甲醇，在1500r/min下振荡5min，加入3g无水硫酸镁、2g氯化钠，涡旋1min，在4000r/min离心5min，取1.5mL上清液加入含有净化剂（糙米：150mgMgSO4+50mgC18+50mgPSA，稻壳：150mgMgSO4+50mgPSA，稻秆：150mgMgSO4+20mgGCB+50mgPSA）的2mL离心管中，涡旋1min，在5000r/min离心5min，取上清液，经0.22μm有机膜过滤，待HPLC-MS/MS分析。

二氯喹啉酸甲酯：准确称取5g粉碎样品（糙米、稻壳和稻秆）于50mL离心管中，加入5mL乙腈，然后在1500r/min下振荡5min，加入3g无水硫酸镁、2g氯化钠，涡旋1min，在4000r/min离心5min，取1.5mL上清液加入含有净化剂（糙米：150mgMgSO4+50mgC18+50mgPSA，稻壳：150mgMgSO4+50mgPSA，稻秆：150mgMgSO4+20mgGCB+50mgPSA）的2mL离心管中，涡旋1min，在5000r/min离心5min，取上清液，经0.22μm有机膜过滤，待HPLC-MS/MS分析。

1.4.2HPLC-MS/MS检测条件

色谱条件：AgilentEclipsePlusC18色谱柱（50mm×2.1mm,1.8μm）；柱温40℃；进样体积1μL；流动相A相为乙腈，B相为0.2%甲酸水溶液，梯度洗脱程序：0～1min为10%A,3.0min为90%A,4.0min为10%A，分析时间是4min，流速为0.3mL/min;80%甲醇水溶液洗针。

质谱条件：电喷雾正离子源（ESI+）；多反应监测模式（MRM）；雾化气为99.95%氮气，碰撞气和干燥气为99.99%氮气，干燥气温度325℃，流速8.0L/min；鞘气温度350℃，流速10.0L/min；毛细管电压4.5kV；喷嘴电压500V。二氯喹啉酸母离子为m/z242.0，定量和定性离子分别为m/z224.0和m/z161.0，二氯喹啉酸甲酯母离子为m/z256.1，定量和定性离子分别为m/z224.0和m/z161.1；驻留时间120ms；裂解电压60V；碰撞能15eV。

1.4.3标准溶液配制及标准曲线的绘制

分别准确称取二氯喹啉酸和二氯喹啉酸甲酯标准品0.01g（精确至0.0001g），用色谱甲醇溶解并定容至100mL容量瓶中，配制成100mg/L标准溶液。二氯喹啉酸用色谱甲醇和基质（糙米、稻壳和稻秆）空白对照液逐级稀释成0.05、0.1、0.5、1、2、5mg/L系列标准溶液，二氯喹啉酸甲酯用色谱甲醇和基质（糙米、稻壳和稻秆）空白对照液逐级稀释成0.01、0.05、0.1、0.5、1、5mg/L系列标准溶液。现用现配，所有溶液均于4℃下避光保存。

采用外标法定量，分别以2种化合物基质标准溶液的质量浓度为横坐标，监测定量离子对的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。

1.4.4添加回收试验

在空白糙米、稻壳和稻秆基质中分别添加二氯喹啉酸和二氯喹啉酸甲酯标准溶液，二氯喹啉酸质量分数添加水平为0.05、0.1、1mg/kg，二氯喹啉酸甲酯质量分数添加水平为0.01、0.1、1mg/kg。每个水平重复5次。按照上述方法进行样品前处理和检测。计算日内平均回收率、日内相对标准偏差和日间平均回收率、日间相对标准偏差。

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