④根据100～1000uL量程的移液器检定报告，移取800uL液体的误差为士0.5%，则相对不确定度为：

综上计算，在样品的前处理过程中，由于移取试剂引入的不确定度为：

4.2.3 标准物质纯度引入的不确定度

本实验中所用的标准物质为37种脂肪酸甲酯混合标准品，分析不确定度时选取C16∶0棕榈酸进行计算。由标准物质证书信息可知混标中棕榈酸甲酯的纯度为99.90%，则由标准品纯度引入的标准不确定度和相对不确定度分别为：

4.2.4 方法重复性引入的不确定度

分别取6份鲜马奶样品进行平行实验，测定其棕榈酸的含量，实验结果如表2。

计算棕榈酸含量的平均值，并依据贝塞尔公式计算出棕榈酸含量的标准偏差S：

式中x为脂肪酸的含量，n为实验的次数。根据不确定度的A类评定标准，对于经过平均的结果，平均值的标准不确定度采用平均值的标准差：
 

计算可知，6次测定鲜马奶中脂肪酸含量的标准偏差S（rep）=0.361g/100g；测定方法重复性的标准不确定度为u（rep）=0.147g/100g；故测定鲜马奶中的棕榈酸时，由方法重复性引入的不确定度为0.225%。

4.2.5 方法回收率引入的不确定度

在评定测定鲜马奶中脂肪酸的不确定度时，通过进行加标回收实验来探究方法回收率引入的不确定度。选取脂肪酸谱图中最具显著性的脂肪酸C16∶0棕榈酸做加标回收实验，所得数据如表3。

计算加标回收率的平均值，并依据贝塞尔公式计算出加标回收率的标准偏差S，根据不确定度的A类评定标准计算回收率的标准不确定度，进而得出相对不确定度，计算方法与4.2.4中相似。

计算可知，测定鲜马奶中棕榈酸的加标回收率的标准偏差S（R）=2.40%；标准不确定度为u（R）=0.980%；进一步计算相对标准不确定度urel（R）=0.996%。故测定鲜马奶中的棕榈酸时，方法回收率引入的不确定度为0.996%。

4.3 合成不确定度的计算

综合各分量不确定度的结果，根据下式计算测定鲜马奶中脂肪酸的合成标准不确定度：

4.4 扩展不确定度的计算

参照标准JJF1059.1-2012测量不确定度评定与表示[24]，对于大多数测定不确定度的评定，按正态分布取置信水平95%，k=2。实验采用气相色谱法测定鲜马奶中脂肪酸的含量，并选取C16：0棕榈酸为标志性脂肪酸计算了不确定度。按扩展不确定度计算公式：U=k×uc，计算得到脂肪酸的扩展不确定度为：U（C16∶0）=2.42mg/100g。

综上，对于本次实验的鲜马奶样品，其中棕榈酸的含量可表示为：（65.4±2.42）mg/100g，k=2，p=95%。

5 结论

将鲜马奶样品甲酯化后经气相色谱法测定其中的脂肪酸含量，结果表明鲜马奶中脂肪酸组成较为丰富，具有独特的营养价值。选取含量较高的棕榈酸C16∶0对该实验方法进行验证，可知棕榈酸甲酯在50.75～1015μg/mL范围内有良好的线性关系；同一样品的实验重复性较好，符合常规实验精密度的要求；选取线性范围的最低点50.75μg/mL加标时信噪比符合常规实验的检出限，可初步作为实验方法的检出限参考值；在线性范围内加标，验证可知方法的回收率在94.58%～102.1%之间。

评定方法的不确定度时，根据实验操作和结果计算分析得出称取样品误差m、移取试剂体积误差V、标准物质纯度误差P、方法重复性误差rep、方法回收率误差R的不确定度分量分别为：0.000576%、1.55%、0.0578%、0.225%、0.996%。显然，称取样品引入的不确定度对总的不确定贡献基本可以忽略不计，说明采用该精度的天平足以达到要求；方法重复性引入的不确定度也较小，证明该方法复现性较强；标准物质纯度在实验中需纳入计算范围，保证实验结果的准确性；移取试剂体积和方法回收率引入的不确定度相对重要，在实际的实验操作中需要从人为和仪器容器因素多方面保证精确度；每次实验时同时做加标回收实验，保证测定结果的准确性。

此外，在本文中为方便计算和讨论，只选取了棕榈酸C16∶0为例进行分析。如需进一步验证气相色谱法测定其他脂肪酸的含量及不确定度时，可依照此方法增加相应的内容。

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