2.3 流动相比例和梯度洗脱

实验考查了流动相比例和梯度洗脱对五种添加剂分离效果的影响。实验选取了四种流动相方式，分别是甲醇 – 乙酸铵溶液比例为：（1）15∶85（ 图 6）；（2）10∶90（ 图 7）；（3）5∶95（ 图 9、10）；（4）梯度洗脱：0 ～ 3min：20∶80；3 ～5min ：50∶50 ；5 ～ 15min ：80∶20 ；15 ～20min：5∶95（图 8）

实验结果表明：在流动相甲醇 – 乙酸铵比例为 15∶85 和 10∶90时，五种添加剂组分出峰只有四个（见图 6 ～ 7），糖精钠和脱氢乙酸峰混在一起无法分离；选择梯度洗脱体系时五种添加剂可以完全出峰，但是苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的保留时间间隔太短，不能完全分离开来（图8）；而在选择流动相甲醇 – 乙酸铵比例为 5∶95时，五种添加剂组分可以完全完整的分开（见图9 ～ 10）

2.4 流动相流速的选择

流动相的流速主要影响溶质与固定相和流动相的相互作用，从而改变待测组分的保留时间及各组分之间的分离度。流速过快，可能导致色谱柱压升高，系统压力过高导致漏液；流速过慢则会延长待测物的保留时间，引起色谱峰拖尾，所以在实验过程中要选择合适的流速。实验结果表明：当流动相流速为 1.0mL/min 时，五种添加剂虽然出峰良好，但山梨酸和糖精钠的保留时间比较接近，可能导致积分误差；而当流速为 0.9mL/min时，五种添加剂可以完全分离，各组分出峰效果较好，出峰顺序分别为：安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸（见图 9 ～ 10）；综上所述，实验选择检测波长为 230nm，流动相体系为甲醇 – 乙酸铵，流动相比例为 5∶95，流速为 0.9mL/min，进行下一步实验。

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