试验旨在建立检测饲料中16种氨基酸的液相色谱-串联质谱（LC-MS）方法。采用C18反相色谱柱进行组分分离，以0.1%甲酸水和甲醇按梯度洗脱程序进行洗脱，优化色谱条件和质谱参数。结果表明，16种氨基酸在0.01～50.00μmol/L范围内线性良好，线性相关系数均大于0.991 0，检出限为1～10 ng/g，定性重复性为0.02%～0.12%，定量重复性为0.11%～0.94%，回收率为97.3%～104.0%。在不同种类的样品测试中，该方法与国家标准方法的相对偏差均小于5%，结果准确可靠。试验方法检测效率高、灵敏度高、回收效果良好、定性和定量准确，能够满足饲料中16种氨基酸的常规检测。

氨基酸是含有碱性氨基和酸性羧基的一类有机化合物，是构成生命体蛋白质的基本物质。蛋白质作为人体必需的营养物质，在人体内不能被直接利用，而是在胃肠道中经过多种消化酶的作用，将高分子蛋白质分解为低分子的氨基酸后被人体吸收。氨基酸进入血液中与其输出速度几乎相等，使体内氨基酸代谢处于动态平衡。当摄入的蛋白质含量适宜时，蛋白质和氨基酸之间不断合成和分解形成一种平衡，从而达到机体的营养平衡状态。蛋白质突然增加或减少摄入量时，平衡机制会被破坏。如果持续时间过长，可能会导致体内抗体的死亡。饲料作为畜禽动物摄入的食物，对其所含氨基酸含量的监测至关重要。

检测氨基酸的方法有氨基酸分析仪法、毛细管电泳检测紫外测定法、衍生-电位传感法、高效液相色谱法等。氨基酸分析仪法最为常见，但分析时长在1 h以上、检测效率低；毛细管电泳检测紫外测定法存在精度低、检测结果不准确的缺点；高效液相色谱法检测时长较长、需要柱前衍生、操作步骤烦琐。所以，建立一种能快捷准确的测定饲料中氨基酸含量的液相色谱-串联质谱法迫在眉睫。目前，已有液相色谱-串联质谱法（LC-MS）检测食品和保健品中的氨基酸含量。本研究建立能同时测定不同种类的饲料中16种氨基酸的LC-MS方法，为饲料中氨基酸含量的测定提供技术参考。

1材料与方法

1.1试验仪器

Ulti Mate 3000液相色谱系统（Thermo）、TSQ Quantiva质谱仪（Thermo）、MS205DU十万分之一天平（Mettler Toledo）、101-1A电热鼓风干燥箱（北京科伟永兴仪器有限公司）、MTN-5800A氮吹仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）、涡轮混合器。

1.2试验试剂

16种氨基酸标准溶液（100 nmol/m L）购自德国曼默博尔公司；盐酸（优级纯）购自四川西陇科学有限公司；甲酸（色谱纯）购自赛默飞世尔科技（中国）有限公司；购自甲醇（色谱纯）Sigma公司。

6 mol/L盐酸溶液：500 m L盐酸和500 m L等比例混合；0.1%甲酸溶液：移取1.0 m L甲酸于1 000 m L容量瓶中，用超纯水定容至刻度。

1.3试验方法

1.3.1色谱条件

色谱柱：Hypersil GOLD 50×2.1 mm,1.9μm；柱温：40℃；流速：0.2 m L/min；洗脱程序见表1。

1.3.2质谱条件

离子源：可加热电喷雾离子源（H-ESI）；扫描模式：正离子扫描；喷雾电压：3 500 V；鞘气：35 psi；辅助气：10 psi；离子传输管温度：350℃；源温度：300℃；16种氨基酸质谱多反应监测（SRM）参数见表2。

1.3.3标准工作溶液的配制

准确移取1.2中的16种氨基酸标准溶液1.0 m L于10 m L棕色容量瓶中，用0.1%甲酸水溶液稀释并定容至刻度，配制成浓度为10μmol/L的标准工作溶液。

1.3.4样品前处理

称取试样约100 mg，置于20 m L水解管中，加入6 mol/L的盐酸溶液10.0 m L，于氮气下充氮3 min，赶去管中空气，加盖；（110±2）℃的电热鼓风干燥箱中水解24 h，取出冷却，摇匀，使用快速定性滤纸过滤至另一10 m L离心管中；量取0.1 m L样液于55℃下氮气吹干，按样品中氨基酸含量，加入1～10 m L的0.1%甲酸水溶液复溶，过0.22μm水相滤膜后上机测定，上机溶液中各氨基酸含量应与标准工作溶液相近。

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