2 试验结果及分析

2.1 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对RAW264.7细胞存活率的影响

有研究表明若样品浓度超过细胞无毒性浓度范围，则会对细胞造成毒害作用。通过测定不同质量浓度的样品对细胞存活率的影响，确定适合后续研究的样品质量浓度范围。由图1a可以得出，异绿原酸A质量浓度在0.1～2mg/mL范围对细胞存活率无显著性影响；异绿原酸C质量浓度在0.1～1mg/mL范围对细胞存活率无显著影响，然而当样品质量浓度增到2mg/mL时，细胞存活率提高了27.80％：甜叶菊废渣提取物质量浓度在0.1～1mg/mL范围对细胞存活率无显著影响，当样品质量浓度达2mg/mL时，细胞存活率提高18.73％。这说明较高质量浓度的异绿原酸C和甜叶菊废渣提取物可促进细胞的增殖。本试验样品无毒质量浓度范围可选择0.1～2mg/mL。

如图lb所示，加入LPS诱导的RAW264.7炎症细胞与正常细胞相比，存活率下降19.46％。当异绿原酸C质量浓度为1mg/mL时，对LPS诱导的RAW264.7细胞的存活率有促进作用，RAW264.7细胞存活率提高23.32％：当异绿原酸A和异绿原酸C质量浓度2mg/mL时，RAW264.7细胞存活率分别提高25.92％和43.22％。而甜叶菊废渣提取物质量浓度在0.1～2mg/mL范围内对RAW264.7细胞的存活率均无显著性作用。综上可以得出，3种样品对RAW264.7细胞存活率的促进效果为异绿原酸C＞异绿原酸A＞甜叶菊废渣提取物。

2.2 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对炎症细胞NO生成量的影响

检测细胞N0生成量是抗炎活性研究中常用的手段之一。细胞在正常情况下生成少量N0，在炎症状态下大量产生N0，并释放到细胞培养液中，通过检测细胞培养液中N0含量可以反映细胞炎症状态及样品的抗炎效果。由图2可知，RAW264.7细胞加入LPS诱导后N0释放量显著增至18.87LLmol/L，约为正常RAW264.7细胞N0生成量(5.73μmol/L)的3.3倍。当样品质量浓度为0.1mg/mL时，异绿原酸A、异绿原酸C和甜叶菊废渣提取物对炎症细胞N0生成量无显著影响；质量浓度在0.5～2.0mg/mL范围的异绿原酸A、异绿原酸C和甜叶菊废渣提取物对RAW264.7细胞N0生成量有明显的抑制作用，且随样品质量浓度的增加抑制效果增强。当质量浓度达到2.0mg/mL时，与LPS组相比，异绿原酸A、异绿原酸C和甜叶菊废渣提取物组中RAW264.7细胞N0的生成量分别减少43.60％，65.62％和57.59％。该结果表明，异绿原酸A、异绿原酸C和甜叶菊废渣提取物均可抑制炎症环境下NO的产生，进而减轻炎症，发挥抗炎作用，且在样品质量浓度为2.0mg/mL时甜叶菊废渣提取物与异绿原酸C和异绿原酸A抗炎效果均无显著性差异。由此推测，异绿原酸C的抗炎效果高于异绿原酸A，可能与二者分子结构不同有关，同时甜叶菊废渣提取物的抗炎作用也可能与甜叶菊废渣提取物中其它黄酮类和酚酸类的物质有关。zhao等研究显示甜叶菊废渣提取物中除含有异绿原酸外，还含有丰富的绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、槲皮苷和槲皮素。Gao等研究结果显示绿原酸对脂多糖诱导的乳上皮细胞炎症反应有一定的保护作用。宋亚玲等研究金银花中酚酸类成分及其抗炎活性，发现绿原酸、隐绿原酸和咖啡酸对LPS刺激的巨噬细胞炎症因子均有不同程度的抑制作用。Hou等研究表明槲皮素对MC903诱导的特应性皮炎小鼠模型有很好的抗炎作用。袁雯雯等研究结果显示不同浓度的咖啡酸对经LPS刺激后的HUVECs细胞的存活率有一定的促进作用。

2.3 甜叶菊废渣提取物及其主要成分异绿原酸对角叉菜胶致小鼠足趾肿胀的影响

角叉菜胶作为诱导剂的致炎模型，常用于抗炎药物的药效评价等领域，其根据注射后小鼠足部的肿胀度差异来分析样品的抗炎效果。由表1可知，阿司匹林与地塞米松阳性对照组均对小鼠足趾肿胀度有显著的抑制作用，其中地塞米松抑制效果最好，抑制率39.47％。在低剂量与中剂量组中，异绿原酸C对小鼠足趾肿胀均有明显的抑制作用，异绿原酸A与甜叶菊废渣提取物对其无显著作用；在高剂量时，异绿原酸A、异绿原酸C和甜叶菊废渣提取物均对小鼠足趾肿胀有明显的抑制作用，抑制率分别为32.71％，34.65％和21.80％，抗炎效果排序依次为异绿原酸C＞异绿原酸A≈甜叶菊废渣提取物。推测甜叶菊废渣提取物中的抗炎成分可能是异绿原酸A和异绿原酸C。有研究表明，异绿原酸A和异绿原酸C可以抑制白细胞迁移和炎症过程超氧阴离子的产生，具有良好的抗炎活性。异绿原酸C的抗炎效果比异绿原酸A的抗炎效果好，可能与二者的化学结构差异有关。

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