迷迭香现在全世界各国广泛栽培。迷迭香中含有多种化学物质，主要成分为黄酮类、萜类、有机酸类和其他类，萜类是含量最多的一类，目前已经分离鉴定的化合物有迷迭香酸、鼠尾草酚、鼠尾草酸、齐墩果酸和熊果酸。迷迭香酸易溶于甲醇、乙醇水溶液、水，而难溶于氯仿、石油醚等有机溶剂；耐高温能力强，可耐受长期240℃高温油炸而保持高抗氧化能力，可代替热不稳定的超氧化物歧化酶SOD作为自由基清除剂。迷迭香酸在不同植物中的含量各异，其应用价值也各不相同。迷迭香酸提取纯化方法主要有水提法、有机溶剂提取法、超声辅助提取法、微波辅助提取法、膜分离技术、大孔树脂吸附法、结晶法等。水提法既提取出水溶性有效成分，同时也提出一些水溶性杂质，如水提法分离的迷迭香酸粗品中含有较多的焦糖色素、蛋白和多糖类杂质，为后续纯化增加了困难。超声波和微波辅助提取法具有提取效率高、提取时间短的优点，但均为辅助提取方法，且需超声或微波设备。有机溶剂提取法可以有效减少一些水溶性杂质的溶出，便于后续的分离和纯化。目前采用乙醇提取得到的迷迭香酸粗品含量基本在3～6%。

本文以5%含量的迷迭香酸粗品为原料，优选萃取剂种类、萃取时间、次数、时间等因素，使产品中迷迭香酸含量大于≥35%（GB1886.172—2016《食品添加剂迷迭香提取物》要求大于5%），并且实现脱色，为实施迷迭香酸的工业化生产及应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

实验所用乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙醚、石油醚、正丁醇、三氯甲烷、正己烷、重铬酸钾、硫酸钴、盐酸等分析纯试剂均采购国药集团化学试剂有限公司。迷迭香干叶由河南尚佳农业科技有限公司提供。迷迭香酸标准品（含量：98%），购自西安利时生物科技有限公司。

1.2 仪器与设备

1260高效液相色谱仪：安捷伦科技有限公司；752N紫外可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；GL-20G-C高速冷冻离心机：上海安亭科学仪器厂；BSA224S-CW电子天平：赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；RE-52A旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；RNF-0460卷式膜多功能小试设备：厦门世达膜科技有限公司；YC-1800喷雾干燥机：上海雅程仪器设备有限公司；20升多功能提取系统：河南宁烁仪器设备有限公司。

1.3 迷迭香酸粗品制备

取迷迭香干叶按1∶10加含75%乙醇水溶液（pH=2），加入到20L萃取罐中，85℃回流提取1.0h，放出萃取液，再加入8倍75%乙醇水溶液（pH=2），回流提取1.0h离心后，合并提取液，过四层纱布，闪蒸仪浓缩蒸馏出酒精，卷式膜过滤，喷雾干燥得含量约为5%粗品。

1.4 迷迭香酸含量及色度测定

1.4.1 标准品及样品配制

用甲醇溶解标准品配置成0.2mg/mL迷迭香酸标准溶液。

将待测迷迭香酸粗品配制为2mg/mL的水溶液（pH=2），测定色度和迷迭香酸含量。

1.4.2 高效液相色谱法测定迷迭香酸含量

色谱条件：二极管阵列检测器（DAD），流动相为甲醇∶水=60∶40，流速为1mL/min，进样量为10μL。

1.4.3 色度标准曲线的绘制及脱色率的计算

（1）色度标准曲线的绘制

标准色度单位：1L水中溶解有1mg铂和0.5mg钴，称该溶液所具有的色度为1度。500色度标准使用液配制：称取0.0437g重铬酸钾和1.0g硫酸钴，加水溶解后继续加入0.5mL硫酸，配成500mL的溶液。以蒸馏水为对照液，在340nm～360nm的波长范围内测定500色度标准使用液的吸光度，选出最大吸收波长。分别用移液枪移取1mL、2mL、3mL、4mL500色度标准使用液到四个5mL容量瓶中，加蒸馏水定容（稀释后，色度分别是100、200、300、400）。在最大波长处测吸光值。以溶液色度为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制色度标准曲线。

（2）计算脱色率：

将提取液稀释一定的倍数，在最大波长处测吸光值，将吸光值代入色度线性回归方程，求得产品色度。脱色率按下式计算：
 

1.5 萃取溶剂的选择

称取9份10g原料，用60mL酸水溶解，离心去除不溶物。分别用1.0倍体积的乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙醚、石油醚、正丁醇、三氯甲烷、正己烷进行萃取，共萃取两次，采用高效液相色谱仪检测上下相中迷迭香酸的含量，确定最佳的两相分配工艺。

1.6 溶剂萃取工艺优化实验设计

1.6.1 正丁醇萃取水相和含醇水相迷迭香酸的分配情况

分别用15%乙醇和纯水溶解含量为90%的迷迭香酸样品配制成0.2mg/mL样液，加入等体积的正丁醇进行萃取，各重复3份，测定上下相中迷迭香酸的含量。

1.6.2 正丁醇萃取不同pH水相迷迭香酸的分配情况

分别以不同pH的水相溶解含量为90%的迷迭香酸样品，用等体积正丁醇萃取，分相后，高效液相色谱法检测上下相中迷迭香酸的含量及分配情况。

1.6.3 萃取剂的选择

按料液比1∶8加入酸水溶解迷迭香粗提物，离心去除不溶物，分别用乙醚、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、三氯甲烷、正丁醇、石油醚、正己烷萃取按照1∶1的体积比进行萃取，共萃取两次，检测两次萃取后上相和最后的下相迷迭香酸的含量。

1.6.4 四种萃取剂的对比实验

选用含量为5%的迷迭香酸粗品，用pH2～3的酸水溶解配制为1mg/mL样液，分别用等体积的正丁醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯和乙酸甲酯萃取后，测定所得产品的色度及迷迭香酸的含量，确定最佳的萃取剂。

1.6.5 正交试验设计

设计L₉（3⁴）的三因素三水平正交实验考察萃取剂种类、萃取水相的pH和萃取剂用量（为水相的倍数）对脱色率及含量的影响。

1.7 数据处理

采用SPSS16软件进行数据分析。

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