苯甲酸(钠)的测定有气相色谱法、紫外分光光度法、高效色相色谱法和滴定法等。

(一)高效液相色谱法

1、测定原理

试样加温除去二氧化碳和乙醇，调节pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

2、试剂

①氨水：1+1。

②甲醇：经0.5μm滤膜过滤。

③碳酸氢钠溶液：20g/L。

④乙酸铵溶液：0.02mol/L。称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL溶解，经0.45μm滤膜过滤。

⑤苯甲酸标准贮备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加5mL碳酸氢钠溶液(20g／L)，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至刻度，作为储备溶液，此溶液每毫升含苯甲酸1mg。

⑥苯甲酸标准使用溶液：吸取苯甲酸标准储备溶液10.0mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度，经0.45μm滤膜过滤，该溶液每毫升相当于0.10mg的苯甲酸。

3、仪器

高效液相色谱仪(带紫外检测器)。

4、操作方法

(1)试样处理

①果汁类：称取5.00～10.0g试样，用氨水(1+1)调pH约7，加水定容至适当的体积，离心沉淀，上清液经0.45/μm滤膜过滤。

②汽水：称取5．00～10.0g试样，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)调pH～约7。加水定容至10～20mL，经0.45μm滤膜过滤。

③配制酒类：称取10.0g试样，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水(1+1)调pH约7，加水定容至适当体积，经0.45μm滤膜过滤。

(2)高效液相色谱参考条件

①柱：WG-C₁₈4.6mm×250mm，10μm不锈钢柱。

②流动相：甲醇-乙酸铵溶液(0.02mol／L)(5+95)。

③流速：1mL／min。

④进样量：10μL。

⑤检测器：紫外检测器，波长230nm，0.2AUFS。

(3)测定：根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

5、结果计算

式中： X——试样中苯甲酸含量，g/kg；

m’——进样体积中苯甲酸的质量，mg；

V₂——进样体积，mL；

V₁——试样稀释液总体积，mL；

m——试样质量，g。

6、讨论

①被测溶液pH对测定和色谱柱使用寿命均有影响，pH＜8或pH＜2时影响被测组分的保留时间，对仪器有腐蚀作用，以中性为宜。

②测定苯甲酸、山梨酸也可以用MicroPAKCN 104mm×300mm柱，流动相可用甲醇-水。

③苯甲酸回收率为90％～110％，山梨酸回收率为90％～95％。

(二)紫外分光光度法

1、原理

样品中的苯甲酸在酸性条件下可随水蒸气蒸出，与样品中的非挥发性组分分开，然后用硫酸和重铬酸钾溶液处理，使苯甲酸以外的其他有机物氧化分解，将此氧化后的溶液再次蒸馏，用碱液吸收苯甲酸。纯净的苯甲酸钠在225nm处有最大吸收，测定吸光度值并与标准品比较，即可计算出样品中苯甲酸的含量。

2、操作方法

(1)样品处理：称取10.0g均匀的样品，置于250mL蒸馏瓶中，加1mL磷酸、20g无水硫酸钠、70mL水、数粒玻璃珠，进行蒸馏。用预先加有5mL 0.1m01/L NaOH的50mL容量瓶接收馏出液，约收集到45mL时停止蒸馏，用少量水洗涤冷凝器，最后稀释至刻度。吸取蒸馏液25mL置于另一250mL蒸馏瓶中，加入33mL 1mol/L重铬酸钾溶液25mL、2mol/L硫酸溶液6.5mL，加热回流10min，冷却，再加1mL磷酸、20g无水硫酸钠、40mL水、数粒玻璃珠，按上述方法进行第二次蒸馏，收集馏出液并稀释至刻度。

(2)测定：取第二次蒸馏液5～20mL，用0．01mol/L NaOH定容至一定体积，以0.01mol/L NaOH为对照液，于225nm处测定吸光度值。

用5mL 1mol/L氢氧化钠代替1mL磷酸进行第一次蒸馏，按上述样品处理方法做空白试验，测定空白溶液的吸光度。

3、结果计算

式中：X——样品中苯甲酸的含量，g/kg；

m₁——测定用样品溶液中苯甲酸的含量，mg；

m₀——测定用空白溶液中苯甲酸的含量，mg；

V——测定用第二次蒸馏液的体积，mL；

m——样品的质量，g。

二、山梨酸（钾）的测定

山梨酸俗名花楸酸，化学名称为2，4-己二烯酸。山梨酸及其钾盐作为酸性防腐剂，在酸性介质中对霉菌、酵母菌、好氧性细菌有良好的抑制作用，可使这些微生物酶系统失活。

但对厌氧的芽孢杆菌、乳酸菌无效。山梨酸是一种不饱和脂肪酸，在机体内可参与正常的新陈代谢，是目前被认为最安全的一类食品防腐剂。

山梨酸(钾)的测定方法看气相色谱法、高效液色谱法、比色法等。其中气相色谱法、高效液相色谱法测定山梨酸(钾)，其原理、样品制备、所用试剂、仪器及操作都与苯甲酸的测定完全相同，只是将苯甲酸的标准贮备液及标准使用液换为山梨酸(钾)。具体操作见本节苯甲酸的测定。

下面介绍分光光度法。

1、测定原理

提取稃品中山梨酸及其盐类，经硫酸-重铬酸钾氧化成丙二醛，再与硫代巴比妥酸形成红色化合物，其颜色深浅与丙二醛含量成正比，可于530nto处比色定量。

2、试剂

(1)重铬酸钾-硫酸溶液：0.1m01/L重铬酸钾与0.15mol/L硫酸以1：1混合备用。

(2)硫代巴比妥酸溶液：准确称取0.5g硫代巴比妥酸于100mL容量瓶中，加20mL水，加10mL 1mol/L氢氧化钠溶液，摇匀溶解后再加1mol/L盐酸1mL，以水定容(临时用配制，6h内使用)。

(3)山梨酸钾标准溶液：准确称取250mg山梨酸钾于250mL容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容(本溶液山梨酸含量为lmg/mL，使用时再稀释为0.1mg/mL)。

3、仪器

分光光度计；组织捣碎机；10mL比色管。

4、操作方法

(1)样品处理：称取100g样品，加200mL水于组织捣碎机中捣成匀浆。称取匀浆100g，加水200mL继续捣1min，称取10g于250mL容量瓶中定容，摇匀，过滤备用。

(2)标准曲线绘制：吸取0.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL山梨酸钾标准溶液于250mL容量瓶中，用水定容。分别吸取2.0mL于相应的10mL比色管中，力Ⅱ2mL重铬酸钾一硫酸溶液，于100℃水浴中加热7min，立即加入2.0mL硫代巴比妥酸，继续加热10min，立刻用冷水冷却，于530nm处测吸光度，绘制标准曲线。

(3)试样测定：吸取式样处理液2mL于10mL比色管中，按标准曲线绘制操作，于530nm处测吸光度，以标准曲线定量。

5、结果计算

式中：X₁——山梨酸钾含量，g/kg；

X₂——山梨酸含量，g/kg；

c——试液中含山梨酸钾的浓度，mg/mL；

m——称取匀浆相当于试样质量，g；

1.34——山梨酸与山梨酸钾之间的换算系数；

250——样品处理液总体积，mL；

2——用于比色时试样溶液的体积，mL。

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