香菜为叶菜，其表层微生物菌种总数多，类型繁杂。微生物菌种的浸染不但会危害香菜的外型，本质上也减少了服用使用价值，降低货架期時间”。香菜栽种的土壤层、气侯等自然环境情况不一样，伴随着栽培技术的提升与标准的扩张，现切生产加工经营规模的不断发展，从农田到餐桌椅的阶段增加，这种都提升了现切香菜微生物菌种环境污染的风险性，也增多了微生物菌种操纵的难度系数。

氢氧化钙、氢气、次氯酸钙等能在水中造成次氯酸钠的农药杀菌剂总称之为有效氯农药杀菌剂，在其中次氯酸钠是现阶段使用最普遍的有效氯农药杀菌剂。此农药杀菌剂以氯为主导，在溶液中产生有强氧化性的次氯酸钠，次氯酸钠穿透微生物菌种的细胞质进入体细胞，与胞内蛋白质造成钛酸异丙酯反映进而凝结细胞液，可高效杀掉病菌，实际效果显著且反应灵敏。现阶段，许多公司具体应用氢氧化钙做为农药杀菌剂，并关键检测菌落总数与大肠杆菌的调节状况。因为氢氧化钙很有可能存有氯残余而对身体健康造成伤害嘲，因而必须 扩大翠绿色可靠的农药杀菌剂类型，持续发掘新的农药杀菌剂并严控其应用浓度值。

次氯酸钠溶液是一种酸碱性氧化剂，可溶强电解质、酒精、医用乙醚、盐酸等有机溶剂，有很强的刺激怪味，对人的双眼、肌肤、粘膜和呼吸道有刺激效果，特性不稳定，受热或有机化合物、金属离子、强酸等易溶解。

次氯酸钠溶液可消灭细菌繁殖体、细菌、病毒感染、分枝杆菌、细菌芽孢等微生物菌种，且在较低温度下仍合理，其灭菌实际效果受浓度值、溫度、空气湿度、有机化合物等要素危害网。次氯酸钠溶液在浓度值为50mg/1下就能实现较好的灭菌实际效果，基本上对全部现切蔬菜水果表层的腐坏菌和病原菌有显著抑止实际效果，但因其穿透性不强，较低浓度的下虽对飘浮的微生物菌种实际效果显著，而对牢牢地吸咐在现切商品表层的生物功效不显著嘲。次氯酸钠溶液反映的副产品是水和O2，对身体和自然环境无毒性没害，因而被觉得是一种环保节能的农药杀菌剂，FDA已经将其列入非清洗食品类触碰表层消毒杀菌剂。次氯酸钠溶液做为氯系农药杀菌剂的代替品，在现切蔬菜水果生产加工中获得普遍科学研究与运用。

与含氯制剂对比，二氧化氯不容易与有机化合物反映转化成致癌物质、致基因突变、胎儿畸形的化学物质，是现在世界上认可。的全新一代高效率、广谱性、安全性的除菌防腐剂同。它能快速空气氧化病毒蛋白质衣壳中的色氨酸，抑止疫情的非特异吸咐，阻拦其对靶细胞的浸染，还能与病菌以及他微生物菌种蛋白中的一部分碳水化合物产生氧化还原反应反映，溶解毁坏碳水化合物，抑止微生物菌种蛋白质合成，进而造成 微生物菌种身亡。很多欧洲国家相关机构已许可和强烈推荐二氧化氯用以食物的消毒杀菌、防腐蚀、冷藏等，世卫组织(WH0)已将二氧化氯列入A1级安全性高效消毒剂，在我国卫生计生委也已准许二氧化氯为消毒液和新式食用添加剂。

以上3种减菌剂在现切香菜中的减菌实际效果还欠缺科学研究，因而创作者选用氢氧化钙、二氧化氯和次氯酸钠溶液解决现切香菜，明确合适于现切芜荽的最好减菌剂，根据16SrDNA全基因组测序技术检查鉴定现切香菜表层细菌种类，剖析关键发病与致腐病菌，以求更合理地提升现切香菜商品的安全系数。

1 原材料与方式

1.1 实验原材料

香菜：市面上。

1.2 关键实验试剂及仪器设备

1.2.1 关键实验试剂

氢氧化钙、二氧化氯、次氯酸钠溶液、氧化钠、胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖水、琼脂粉、乳清蛋白、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、月桂酸硝酸钠、煌绿乳清蛋白胆盐骨头汤培养液、氢氧化钠溶液、硫酸、酒精、牛肉膏、蛋白胨、结晶紫、草酸铵、碘片、碘酸钾、番红、松柏树油、SK1201-UN10-10立柱式病菌基因DNA抽提检测试剂盒等。

1.2.2 关键仪器设备

DJ300高精密电子分析天平：北京市赛多利斯仪器设备系统软件有限责任公司商品；YXQ-SG41-280手提工作压力蒸汽灭菌锅：上海市华线医疗反物质仪器设备有限责任公司商品：SW-CJ-1FD净化工作台：苏净集团苏州市万通气体技术性有限责任公司商品；GRP-9160型防水防火式恒温培养箱：上海森信实验室仪器有限责任公司商品；XW-80A小型漩涡混和仪：上海市沪西剖析仪器厂有限责任公司商品：HH-6数显式恒温水浴锅：常州市国华家用电器有限责任公司商品：SPX-320型智能化生化培养箱：宁波市江南地区仪器厂商品；PCR反映增加仪：澳大利亚BBI企业商品：3730转录组测序检测仪：美罔ABI企业商品；H6-1小型电泳槽：上海市精益求精有机玻璃板产品仪器厂商品；凝胶成像系统软件：GeneGenius企业商品。

1.3 实验方式

1.3.1 试品及减菌剂的提前准备

选择无枯黄、无机械设备伤、无病害、新鲜程度基本一致的当地现切香菜，去根，冷水洗至可立即服用，晾晒至无水迹，备用。

氢氧化钙(5.2mg/1)配置成浓度值为0、50、100、150、200、250mg/1的水溶液，测量pH各自为6.32、10.33、11.37、11.70、11.90、12.07。

二氧化氯(8mg/1)配置成浓度值为0、20、40、60、80、100mg/1的水溶液，测量pH各自为5.90、3.16、2.87、2.73、2.56、2.41。

次氯酸钠溶液(15.7mg/1)，由A液(醋酸和盐酸)和B液(双氧水)以容积比10:8制取1000mg/1水溶液，反映24h后稀释液成0、50、100、150、200、250mg/1，测量PH各自为6.93、4.79、4.03、3.78、3.60、3.52。
1.3.23种减菌剂解决

较为3种减菌剂减菌实际效果，挑选实际效果最好的减菌剂，以提升减菌剂解决主要参数。3种减菌剂解决标准见表1。全部解决在常温下开展，每一个解决反复3次。

1.3.3 二氧化氯正交和解决

依照1₉(3⁴)正交表，对解决浓度值(20、40、60mg/1)、解决時间(2、5、10min)、水菜容积质量比(4m1:1g、8m1:1g、12m1:1g)三要素开展正交实验，对照实验为冷水洗前及冷水洗后备用的试品。正交试验表见表2。

1.4 测量指标值与方式

1.4.1 菌落总数

参考GB/T4789.2-2016。

1.4.2 大肠杆菌

参考GB/T4789.3-2016。

1.5 病菌的分离纯化与储藏

无菌检测自然环境下，称量25g现切香菜置盛有225m1无菌检测盐水的锥形瓶中，放置摇床80r/min，摇晃20min，马上将试品液稀释液至1×10^-3、1×10^-1、1×10^-5二三个梯度方向，汲取1m1试品匀液于无菌检测培养皿内，每一个稀释液度做两个反复与此同时，各自汲取1m1无菌检测盐水添加两个无菌检测培养皿内作空白试验。立即将牛肉膏蛋白胨培养液竭尽培养皿，并旋转培养皿使其混和匀称。于(36±1)℃颠倒控温塑造(48±2)h。实验反复3次、观查病菌的成长状况及菌体的顏色和特点，并选择优点菌挑菌单菌体，选用平板划线法于牛肉膏蛋白胨培养液画线提纯。于(36±1)℃颠倒控温塑造(48±2)h。持续提纯5代。

挑菌提纯第5代的单菌体注射于牛肉膏蛋白胨斜坡，于(36±1)℃颠倒控温塑造(24±2)h。放置4℃冰柜中储藏。

1.6 病菌形状观查

1.6.1 简落形状观祭

观查提纯第5代平皿内菌体尺寸、菌体形状、菌体色调、菌体表层特点(光洁是否、干躁是否、是不是突起、是不是全透明、是不是存有同舟环等)、边沿标准是否。

1.6.2 革兰氏染色

参考CB/T4789.28-2013。

1.7 16SrDNA序列的剖析以及系统发育树的创建

1.7.1 DNA获取

参考上海生工SK1201-UNIQ-10立柱式病菌基凶组DNA抽提检测试剂盒使用说明书实际操作。

1.7.2 PCR扩增病菌的16SrDNA序列

1) 引物设计编码序列

正方向引物设计27F：5’-AGACTTTCATCCTGGCTCAG-37；反方向引物设计1492R(1510)：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。

2) PCR反映管理体系创建(50μ1)

模版DNA10pmo1，上游引物1μ1，中下游引物设计1μ1，dNTPMix1μ1，10×TaqreactionBuffer5μ1，高保真音响聚合酶(5U/μ1)0.25μ1，无菌检测超纯水系统补充至50μ1。

3) PCR程序流程设置

98℃预转性5min：95℃转性35s，55℃淬火35s，72℃拓宽90s，3五个循环系统；拓宽8min。

1.8 属种评定

将PCR物质送至转录组测序企业开展转录组测序。将转录组测序进行的16SrDNA序列在GenBank(NCBI)中开展B1AST查找，找寻类似编码序列并免费下载，用MEGA制作软件系统发育树明确病菌属种。

1.9 数据处理方法

数据信息取3次反复均值，选用Exce1、SPSS18.0、正交设计小助手等手机软件对信息开展剖析。