华北地区车后（Plantago asiatica L.）别名车前草、车轮草，为车案底车后属多年生长双子叶木本植物，味甘，寒性，生长发育适应能力强，产我国多省地。华北地区车后能够 食药同源双用，其味儿香甜，营养元素丰富多彩，带有含糖量、人参皂甙、醌类、碳水化合物及微量元素检测等各种成份，具备增强免疫作用、缓解疲劳、抗氧化性等作用。现阶段进行与华北地区车后提取液有关的分析较少，本试验进行华北地区车后提取液的抗菌活力以及可靠性科学研究，致力于对其进一步的综合利用拥有充分的实际意义。

现阶段，世界各国获取的加工工艺具体有有机溶剂萃取法、超声波获取及其微波加热获取等，本试验对于华北地区车后具备较高生物活性的特性，采用有机溶剂萃取法加工工艺最高程度上保存华北地区车后提取液的活力。各自科学研究不一样类型有机溶剂及浓度值对华北地区车后提取液取的抗菌活力的危害，并对制取的华北地区车后提取液开展可靠性剖析，为华北地区车后提取液的提炼和开发给予合理的参照根据，能让其充分发挥最高的商品经济使用价值。

一、原材料与方式

1、原材料与实验试剂

橙黄色链球菌、大肠埃希菌、大肠埃希氏菌、沙门菌：我国国家行业标准化学物质研究所试验室；酒精、甲苯、乙酸丁酯、医用乙醚：洛阳市昊华化学药品有限责任公司；华北地区车后：选购于本地中药批发市场。

2、仪器设备及机器设备

快速万能粉碎机：北京市科伟永顺仪器设备有限责任公司；温度控制摇床恒温箱：苏州AIBOER高新科技技有限责任公司AG3000；台式一体机恒温箱：上海市景迈实验仪器有限责任公司YT230。

3、实验方法

（1）华北地区车后粉剂制得

将华北地区车后干物质破碎，过20目筛。

（2）获取方式

①水获取法

选用煎制方法：称量10g华北地区车后粉剂，按料液比1∶10（g/mL）添加纯净水，开水获取4次，每一次1h，合拼四次萃取液，旋蒸。将渗沥液旋蒸至10mL，放到-4℃冰柜中储存预留。

②酒精获取法

取50g华北地区车后粉剂放置500mL量杯中，添加400mL酒精，料液之比1∶8（g/mL），应用磁力搅拌器拌和4h，操纵环境温度为70℃控温，旋蒸回收利用渗沥液。渗沥液在水浴50℃气温下分三次旋蒸至粘稠状无乙醇味水溶液，合拼三次萃取液得中药浸膏，旋蒸浓缩至干，放到-4℃冰柜中储存预留。

③甲苯萃取法法

称量10g华北地区车后粉剂，各自用40mL、30mL、30mL甲苯萃取法三次，萃取法時间各自为2h、lh、1h。每一次萃取法后缓解压力旋蒸，留渗沥液，沉淀再次萃取法。5mL甲苯清洗沉淀并旋蒸，合拼四次渗沥液，旋蒸浓缩至干，放到-4℃冰柜中储存预留。

④医用乙醚萃取法法

称量109华北地区车后干物质于250mL碘量瓶，添加没有水医用乙醚200mL，常温下泡浸4h，旋蒸，旋蒸浓缩至干，放到-4℃冰柜中储存预留。

⑤乙酸丁酯获取法

选用索氏提取法，应用250mL索氏提取器，按料液比1∶20（g/mL）称量华北地区车后粉剂5g，用100mL乙酸丁酯开展索氏提取，在稳定溫度70℃下获取3h，旋蒸，搜集渗沥液。旋蒸至干，放到-4℃冰柜中储存预留。

（3）供试菌苗的活性及菌悬浮液的制取

培养液的调配及供试菌的活性参考沈萍等的方式 。将活性的供试菌苗接转后于37℃塑造24h，待菌体做到多数成长期后，用无菌检测盐水做成菌体浓度值为106～10-7CFU/mL的菌悬浮液，备用。

（4）抗菌活力的测量

选用过滤纸片蔓延法：挑选环形过滤纸片，160℃干热灭菌器2h，将用不一样药水泡浸过的过滤纸片定距置放在有涂菌液的培养皿上，于37℃塑造24h。用十字交叉法精确测量抑菌圈直徑，纪录数据信息，取均值。

（5）与抗菌素抗菌活力比照无菌检测情况下，取100此指示菌悬浮液匀称涂抹于LB塑造板上，35min后将泡浸95％酒精的华北地区车后提取液的无菌检测过滤纸片圆片，粘贴到指示菌平板电脑上，与此同时做氯霉素、强力霉素、杆菌肽、青霉素、青霉素钠等药敏试验测纸的对照实验，每一个解决反复3次，37℃塑造ld，观查各塑造板指示菌的发育情况及抑菌圈尺寸，测量各解决抑菌圈直徑，即是相对应试品抑菌圈值。

（6）最少抗菌浓度值（MIC）

将华北地区车后提取液配置成七个浓度梯度及其一个空白试验，选用过滤纸圆片蔓延法，各自测量。

对橙黄色链球菌、大肠埃希菌、粪链球菌和沙门菌的MIC值。

（7）华北地区车后提取液可靠性试验

①pH对华北地区车后提取液可靠性的危害将华北地区车后提取液萃取液各自调整pH至2、3、4、5、6、7、8、9、10、11，静放1h后，在325mm光波长下测量其OD值，剖析不一样pH对华北地区车后提取液可靠性的危害。

②阳光照射对华北地区车后提取液可靠性的危害将华北地区车后提取液萃取液各自放置太阳光阳光照射、房间内及其遮光自然环境中，每过1h，在325mm光波长下测量其OD值，剖析阳光照射对华北地区车后提取液可靠性的危害。

③溫度对华北地区车后提取液可靠性的危害将华北地区车后提取液萃取液各自在环境温度为30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃的标准下水浴加热1 h后制冷至常温后，在325mm光波长下测量其OD值，剖析溫度对华北地区车后提取液可靠性的危害。

④氧化物和氧化剂对华北地区车后提取液可靠性的危害 各自配置含量为0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％的氧化物H202及其浓度值为0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1％的氧化剂Na2S03。将华北地区车后提取液萃取液每一份10mL各自添加不一样含量的氧化物和氧化剂1mL混匀，另取一份10mL添加1mL纯净水做为试剂空白。然静放1 h后，在325mm光波长下测量其OD值，氧化物和氧化剂对华北地区车后提取液可靠性的危害。