油菜子（BrassicanapusL.）归属于芸薹科（Brassicaceae）芸薹属（Brassica），是在我国具体的粮食作物。伴随着2015年我国油菜子临时性仓储现行政策的注销及其海外進口冲击性的危害，油菜子生产制造的非常经济效益比较严重降低，在较大水平上影响到了在我国农户栽种油菜子的主动性。甘蓝型油菜子是由洋白菜和大白菜历经当然混种杂交后再翻倍后建立的，其2个先祖全是备受众多顾客喜爱的爽口蔬菜水果，从发源与演变的视角看来，将油菜子开发设计为蔬菜水果具备优良的科学研究基本和不可估量的发展潜力。近些年在浙江省、湖北省、湖南省、江苏省等长江下游主产地，因时制宜汇总出“菜用 油用”、“菜用 花用 油用”等多种多样油菜子高效率运用开发方式。有研究表明，在合理的栽种标准下，获得油菜薹后并不会对油菜子的生产量导致明显危害，此方式可合理提升农户栽种油菜子的生产制造经济效益。在长江下游油菜子主产地，油菜子做为冬天农作物，不容易直接影响到关键农作物的栽种。运用冬闲田栽种油菜子，选用油蔬双用技术性(即先割菜薹，后收油菜籽)，对提高油菜子栽种的整体效益，提升居民收入，推动在我国油菜子产业发展规划有着关键实际意义。

油菜子小苗（5叶期）及其油菜薹上都富含充足的维他命C及其其他营养元素，具备很高的吃用使用价值。培养高维他命C油菜薹种类，既可提高油菜薹的菜用使用价值，也能为顾客带来营养健康的功能性蔬菜水果。维他命C又称之为抗坏血酸，是人体内必要的关键维他命之一。针对一个一般成人，身体需要的绝大部分其他维他命饮食强烈推荐供给量都是在20mg/d下列，而维他命C的饮食强烈推荐供给量却为100mg/d，是身体中需要量最高的一种维他命，当身体比较严重缺乏维生素C的时候会造成坏血症，还会继续导致人体免疫力的降低。维他命C是蔬菜水果和瓜果中最普遍的抗氧剂，参加人体内的多种多样氧化还原反应反映。有研究表明，维他命C不但能够 预防癌症，降低恶性肿瘤的发病率，还能够改进和增强身体的免疫功能，与此同时具备防止心脑血管疾病的关键作用。身体本身不能生成维他命C，务必要从新鮮的蔬菜水果、新鲜水果等食品中获得。精确并迅速地测量出食材中的维他命C成分，对确保身体日常维他命C的摄入具备关键实际意义。

现阶段测量食材中维他命C成分的检查办法具体有：碘酸钾滴定法、荧光法、2,6-二氯靛酚滴定法、紫外线光度法、高效液相色谱色谱法等，但大多数实际操作繁杂、测量高效率不高的难题。在执行标准GB5009.86-2016中要求了高效液相色谱色谱法、荧光法、2,6-二氯靛酚滴定法为测量食物中抗坏血酸的方式 ，其中2,6-二氯靛酚滴定法，实际操作简易，可是假如试品中有黑色素等化学物质会对滴定管結果产生危害；荧光法用时较长；而高效液相色谱色谱法是一种简易、高效率、精确的测定法。但现阶段国家标准中的液相色谱法选用的试样前解决较为繁杂，一个试品从解决到上机操作检验最少必须15min，测量高效率不高。在对大人群样版的维他命C开展检查时，怎么才能并精确挑选出高维他命C成分原材料，提升维他命C检验办法的效果就变得至关重要。

维他命C是一种水溶维他命，化学式为C₆H₈O₆，分子结构中邻近的2个甲基非常容易产生溶解并释放出来H ，偏酸并具备较强的氧化性，造成 维他命C极为不稳定。更何况维他命C在恒温标准下易溶解，试品的贮存标准危害检查效果的精确性。因此本分析在国家标准的根基上提升了测量维他命C的液相色谱法，改善后的办法可迅速精确地测量试品中维他命C的成分，与此同时运用液态氮储藏并碾磨油菜子试品，促使该办法可实际操作时间长、检验結果可重复性好、精准灵巧、利用率高，能长时间储存，可用以大人群样版中维他命C的剖析评定及基因遗传分析，为进一步科学研究油菜子中维他命C的生成和基因遗传体制确立了方式基本，有益于培养含有维他命C的油菜子优良品种。

1 原材料与方式

1.1 原材料

2018年10月至11月在中国农业科学院粮食作物研究室阳逻实验产业基地取于的油菜子小苗（甘蓝型油菜子关系人群原材料，抽样阶段为栽种后30d上下）及其青菜（兔子腿矮脚黄）、油麦菜（西班牙全年度耐抽薹油麦菜）、西兰花（小圆叶西兰花）（每一种蔬菜水果的抽样時间均处在可食情况）。每一种油菜子挑选5株尺寸相似的原材料（除掉油菜子的根茎和一部分枯黄），青菜、油麦菜、西兰花一样各取尺寸相似的5株（除掉蔬菜水果的根茎和一部分枯黄）。

1.2 仪器设备与实验试剂

高效率液相色谱（e2695，英国Waters企业）、PDA探测器（2998，英国Waters企业）、离子交换柱（C18柱，柱长250nm，內径4.6nm，粒度5μm，英国Waters企业）、瓶塞分液器（5-50mL，法国Eppendorf企业）、万分之一天平秤（JJ124BC，昆山市双杰检测仪器厂）、十万分之一天平秤（AUW220D，日本安捷伦仪器企业）、均质机（AD500S-P，上海市昂尼仪器设备有限责任公司）、超声波清洗机（SB25-12DT，宁波新芝生物技术股权有限责任公司）、真空过滤设备（DET-01P，达尔拓企业）、多用途破碎机（JYS-M01，九阳股份有限责任公司）。

硫酸（优级纯，国药控股化学药品有限责任公司）、超纯水系统（色谱纯，Rephile-watersystem)、维他命C标准物质（纯净度99%之上，法国Sigma-Aldrich企业）、乙酸铵（优级纯，法国Sigma-Aldrich企业）、工业甲醇（色谱纯，英国Fisher企业）。
尼龙66（Nylon）滤纸（直徑25mm、直径0.45μm，天津津腾实验仪器有限责任公司）、尼龙66（Nylon）滤纸（直徑13mm、直径0.22μm，天津津腾实验仪器有限责任公司）、微孔板水相滤纸（直徑50mm、直径0.25μm，天津津腾实验仪器有限责任公司）、2mL色谱仪气相瓶（上海安谱试验科技发展有限责任公司）、内置管（250μL，上海安谱试验科技发展有限责任公司）。

1.3 方式

1.3.1 溶液的配制

萃取液（1%HCl水溶液）的配置：用移液器汲取10mL硫酸（优级纯）于1000mL容量瓶中，加超纯水系统滴定剂，混匀储备用。
流动性相（20mmol/L的乙酸铵）：用万分之一的天平称取1.54g乙酸铵，融解于200mL的超纯水系统中，超声波15min后，再用超纯水系统滴定剂至1000mL后再次超声波减压蒸馏15min。超声波完毕后用真空过滤泵过微孔板水相滤纸（0.22μm）开展旋蒸，过虑后的水溶液装进流动性相瓶中预留。为防止因流动性相的缘故危害检查效果的精确性，20mmol/L的乙酸铵需现配现用。

维他命C标液(1000μg/mL)：用十万分之一的天平秤精确称量0.1g维他命C标准物质于100mL深棕色容量瓶中，用1%的硫酸融解并滴定剂，充足混匀后置放在4℃冰柜中遮光储存。

1.3.2 鲜试品的前解决

用万分之一的天平秤精确称量2g新鮮油菜子或蔬菜水果试品的叶子，放置50mL离心管架中，并添加40mL萃取液（即1%的HCl），用均质机将试品彻底匀质粉碎。用5mL注射针汲取已匀质的试品匀浆，过双层滤纸（0.45μm 0.22μm），渗沥液过虑到250μL的内置管中，待上机操作检验。

试品存储：将新鮮油菜子或蔬菜水果试品各自储藏在4℃、-20℃、液态氮（-196℃）标准下。3d后，将储藏在4℃、-20℃的一部分试品放进液态氮中冷冻，用多用途破碎机碾成粉状（用以前先用液态氮开展急冷），并放置50mL离心管架中；剩下试品不开展碾磨解决，立即称量2g试品，其他解决办法和检验方式同样。测量出不一样贮存标准及其不一样处理方法下油菜子和蔬菜水果试品中维他命C的成分。

1.3.3 高效率液相色谱（HPLC）的检验标准

离子交换柱，英国WatersXBridge-C18色谱柱；流动性相，工业甲醇和20mmol/L乙酸铵（二者占比为7:93）；流动速度，1.0mL/min；进样量，10μL；总体目标柱温，25℃；检验光波长，245nm；维他命C的保存期，2.7min。