栗子属壳斗科栗属干果绿色植物，在全世界范畴内被当作主要的粮食作物之一。栗子生产加工环节中形成很多的板栗壳仍以点燃和当然烂掉等方法解决，那样既导致了資源消耗也不利环境保护。据材料表明，板栗壳中带有黑色素、有机物、多酚类化合物、含糖量(或苷类)和鞣质等成分。板栗壳的多酚类物质关键成分为单宁酸，而单宁酸的类型包含许多，在其中具备抗氧化性活力构造的主要成分为鞣花单宁酸和花青素。人体内的氧自由基产能过剩会导致各种病症，包含心脑血管疾病、白內障、阿尔茨海默氏症等，可是身体的内源抗氧化性化学物质不能防御力体细胞损害，因此从食材資源中找寻纯天然抗氧剂已成为了探究网络热点。有研究表明板栗壳花青素具备抵挡氧自由基、抗菌灭菌等功效，能够普遍使用于食品类及调味品行业。丁培峰科学研究了茶氨酸在生抽中的防腐蚀实际效果，数据显示，茶氨酸与纳他霉素混配应用后与山梨酸钾具备等同于的防腐蚀实际效果，且安全系数大大的提高。与此同时，茶氨酸具备一定的养生作用，可提升生抽的食用价值和养生作用。

多酚类物质尽管有着多种多样生理学活力和增加调味料保存期的实际效果，可是外部标准也会干扰其可靠性，进而减少它的身理活力，且身体中的胃酸及肠胃消化酶也会对花青素的活力造成危害。比如，获取自姜黄地下茎的多酚类姜黄素的药用价值普遍，毒副作用小，而且一直以来做为调味料和食用添加剂在世界各国广泛运用，可是，因为其溶出度低明显影响到其使用使用价值。现阶段对板栗壳花青素的分析关键在抗氧化及获取提升等层面，对其做为调味料多功能性添加物的研发及其其在人体内中的消化科学研究较少。因而，本试验研究危害板栗壳粗提物中花青素可靠性的要素，运用HPLC-MS科学研究其类型并完成构造表现，与此同时根据身体身体之外消化吸收实体模型科学研究其消化吸收状况，为板栗壳中纯天然抗氧剂的研发以及在食品类和调味料层面的使用给予一定的参照根据。

一、原材料与方式

1、原材料与实验试剂

栗子：源自山东省祁蒙山。

香草醛、α-胃蛋白酶、胆液提取液、蛋白酶、胃蛋白酶：国药控股化学药品有限责任公司；标准物质表儿茶素、没食子酸、表儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶酸、没食子儿茶酸没食子酸酯及其表没食子儿茶酸没食子酸酯：上海市阿拉丁生物化学科技发展有限责任公司。

2、仪器设备与机器设备

TG16-WS离心脱水机长沙市湘智离心脱水机仪器设备有限责任公司；UV-1800紫外线能见光光度计上海美鼎慧仪器设备有限责任公司；pH计梅特勒-托利多仪器设备(上海市)有限责任公司；Agilent1100LC-MSD/TOF高辨别高效液相质谱分析液质仪英国安捷伦科技企业。

3、实验方式

（1）板栗壳粗提物获取制取

将板栗壳清洗晾晒，破碎过40目筛获得板栗壳粉末状。参照苏彩霞等科学研究取得的较佳获取加工工艺，加入适量板栗壳粉末状添加70%酒精溶液，使料液之比1∶15(g/mL)，在65℃的标准下获取90min，再将萃取液开展真空过滤，渗沥液在40℃下真空泵浓缩，再度低温干燥，超低温储存预留。

（2）板栗壳粗提物中花青素可靠性影响因素科学研究

①板栗壳花青素水溶液的制取

称量板栗壳粗提物0.1g，用纯净水滴定剂至100mL，科学研究阳光照射、溫度、金属离子和pH对花青素的危害。

②阳光照射对板栗壳花青素的危害

取10mL板栗壳花青素水溶液3份，各自放置室内温度阳光照射、室内温度遮光和超低温遮光的标准下，置放4d，每过1d抽样测量试品水溶液中花青素成分(以保存率表明)；花青素保存率=试品待比测花青素成分/试品原始花青素成分×100%。花青素的测定法选用盐酸-香草醛酶活性测定。

③溫度对板栗壳花青素的危害

取10mL板栗壳花青素水溶液6份，各自在40，50，60，70，80，90℃标准下恒温水浴槽2h，花青素成分测定法跟上面一样。

④pH对板栗壳花青素的危害

取10mL板栗壳花青素水溶液14份，用HCl和NaOH水溶液配置成pH为1～14的水溶液，将花青素试品与10mLpH为1～14的水溶液混和，密封性静放6h，花青素成分测定法跟上面一样。

⑤金属离子对板栗壳花青素的危害

配置0.02mol/L含Fe³ 、Fe² 、Ba² 等金属离子的水溶液备用，再把不一样金属离子水溶液与花青素水溶液等容积混和，密封性置放一段时间，观查水溶液色调转变。

（3）板栗壳花青素结构特征

用高效液相色谱测量没食子酸、没食子儿茶酸、表儿茶素、没食子儿茶酸没食子酸酯、表没食子儿茶酸没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯6种标准物质及板栗壳粗提物出峰時间，较为得到板栗壳粗提物中常含化学物质，并对粗提物开展高分辨质谱结构特征。

色谱仪标准：离子交换柱为DIONEXC₁₈(4.6mm×250mm，5μm)，流动性相：工业甲醇(B)(摩尔分数为0.05%)-三氟乙酸(A)，梯度方向过柱：0～12min，A：87%～75%，B：13%～20%；12～23min，A：75%～20%，B：25%～80%；23～26min，A：87%，B：13%。流动速度：0.5mL/min；检验光波长：280nm；柱温：35℃；进样量：20μL。

质谱分析标准：离子交换柱为LichrosphersC₁₈柱(4.6mm×250mm，5μm)；质谱分析气相分离之比1∶1；空气负离子方式；离子化方法：ESI；扫描仪范畴：m/z50～2000；干躁气溫度：350℃；干躁气流动速度：15L/min；喷雾器工作压力：40psi；毛细血管工作电压：3500V。

（4）板栗壳花青素的消化

①消化吸收管理体系的制取

胃酸自然环境配置：在250mL量杯中添加0.4g的胃蛋白酶、9mg/mL的氯化钠溶液90mL搅拌，再转到100mL的容量瓶中，用1mol/L硫酸调整使水溶液pH为2～2.3，直到水溶液至容量瓶标尺线。

肠胃自然环境配置：在250mL量杯中添加225mg的蛋白酶、225mg的胆液提取液、9mg/mL的氯化钠溶液90mL搅拌，再转到100mL的容量瓶中，用1mol/L氢氧化钠溶液调整使水溶液pH为7～7.2，直到水溶液至容量瓶标尺线。

②仿真模拟胃酸消化吸收

设定5组平行面实验和一个空白试验，每一组平行面试验标准以下：在50mL锥形瓶中先后添加中口腔内部消化酶4mL、胃消化酶16mL，于37℃、转速比为250r/min的摇床中波动反映2h，每0.5h测1次pH值，根据测pH的转变可分析判断花青素是不是消化吸收；并在反应速度为0.5，1，1.5，2h各取1mL消化酶，测量花青素的成分，并估算其吸收率；吸收率=(1-测得花青素品质/最初添加花青素品质)×100%。

③仿真模拟肠胃消化吸收

设定5组平行面实验和一个空白试验，每一组平行面试验标准以下：量取胃酸消化酶20mL，用氢氧化钠溶液中合到pH为7，停止胃酸消化吸收反映；再添加20mL肠胃消化酶反映2h，并在反应速度0.5，1，1.5，2h各取1mL消化酶测量花青素的成分，并估算其吸收率。