2.6 指纹图谱创建及剖析

2.6.1 指纹图谱的创建

取“2.1”项的标准品水溶液和“2.2”项下供试品水溶液，按“2.3.1”项的色谱仪标准，应用高效率液相色谱检验。所得的满山红叶HPLC对比图普见图4，15批满山红叶色谱仪累加图见图5。

图4所显示，该指纹图谱寻找10个一共有峰，根据与标准品色谱比照，确定16号峰为杜鹃花素，并将9号峰做为参考S峰。

2.6.2 相似性剖析

选用“中药材色谱仪指纹图谱相似性点评系统”(2012版)，选用中位值法先后开展15批满山红叶指纹图谱的相似性点评，結果见表9。依据表9可以得到，15批满山红叶纹图普总体相似性在0.986～0.999，均>0.9，具备较高的一致性。

2.6.3聚类

将15批满山红叶的10个一共有纷纷总面积导进SPSS 20.0，应用均值欧氏距离法，开展聚类，见图6。归类结果显示不一样原产地满山红中药材在归类间距上较远，即便 同一原产地其分类间距也出现显著差异。基本剖析，很有可能与满山红中药材采收時间、存储方法、气侯等相关。15批满山红叶在原产地和批号上其主成分类型具备象征性，指纹识别图普可以体现出试品的全景。

3 探讨

本试验供试品的做法，调查了不一样获取有机溶剂和获取方法对满山红叶指纹图谱的危害。在获取有机溶剂层面，选择了水、60%工业甲醇、稀酒精三种有机溶剂做为获取有机溶剂，結果发觉，满山红干冻粉在三种有机溶剂中的溶解性都很好，可是以水作获取有机溶剂的色谱不管在出峰数量或是分离度上均好于别的二种有机溶剂的色谱，因而挑选水做为获取有机溶剂。在获取方法层面，挑选了超声波获取法和流回获取法，結果发觉，2种方式获取的满山红叶色谱区别不大，可是超声波获取方式更为简单，因而挑选超声波的办法做为获取方式。

本试验针对色谱仪标准的明确，调查了离子交换柱、检验光波长、流动性相系统软件，流动速度、柱温对满山红叶指纹图谱的危害。在离子交换柱层面，选了Shim-Pack XR-ODSⅤ（2.0 mmi.d×150 mm）、Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm）和YMC-Pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5μm）离子交换柱，结果显示试品在Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm）和YMC-Pack ODS-A(4.6 mm×250 mm,5μm）中无法实现分离出来规定，而在Shim-Pack XR-ODSⅤ（2.0 mmi.d×150 mm）离子交换柱中不但出峰快、数量多并且分离度符合规定，因此 挑选Shim-Pack XR-ODSⅤ（2.0 mmi.d×150 mm）离子交换柱做为该试验离子交换柱。

在检验光波长层面，用二极管列阵探测器检（DAD）中200～400 nm先后扫描仪标准品水溶液和供试品水溶液，数据显示在检验光波长297 nm处两个试品均有较大消化吸收，色谱信息内容丰富多彩，杜鹃花素基线噪声较高，因此采用297 nm为监测光波长。在流动性相系统软件层面，选择不一样类型有机相（工业甲醇、乙腈）和不一样成份水相（0.3%苯甲酸溶液、0.3%冰醋酸溶液）组成的流动性相对系统供试品水溶液色谱仪峰分离出来的危害，挑选乙腈-0.3%苯甲酸溶液、工业甲醇-0.3%苯甲酸溶液、工业甲醇-0.3%冰醋酸溶液等流动性相系统软件，数据显示，乙腈-0.3%苯甲酸溶液流动性相系统软件不利试品的分离出来，出峰数量稀缺且分离度不太好，工业甲醇-0.3%苯甲酸溶液和工业甲醇-0.3%冰醋酸溶液流动性相对系统试品分离出来区别不显著，可是工业甲醇-0.3%苯甲酸溶液流动性相系统软件色谱信息内容更丰富，分离度更强，故明确该流动性相系统软件做为该试验检验的流动性相。在流动速度层面，挑选了0.1 mL·min-1、0.2 mL·min-1、0.25 mL·min-1开展挑选。结果显示，用0.1 mL·min-1流动速度检验色谱仪峰出峰不彻底，用0.25 mL·min-1流动速度检验色谱仪峰分离度不太好，用0.2 mL·min-1流动速度检验色谱仪峰出峰数量彻底，分离度不错，故明确流动速度为0.2 mL·min-1。在柱温层面，对25℃、30℃、35℃柱温开展挑选。结果显示上升柱温，分离出来作用下降，因而确认了25℃做为检验柱温。

15批满山红叶的指纹图谱总体相似性范畴0.986～ 0.999，均>0.9，相似性优良，15批满山红叶中杜鹃花素成分RSD为0.11%，说明其成分并没有显著差别，可是聚类結果将15批满山红叶分成四类，且10个一共有纷纷总面积的RSD范畴6%～30%，表明杜鹃花素的成分对其总体成分转变危害不大，别的成分成分转变起关键功效，基本剖析应当与满山红中草药材原产地、生长发育自然环境、采收時间、置放标准和置放時间等相关。

本分析应用高相液相色谱仪分析方法，创建了满山红叶的指纹图谱，该指纹图谱能够 全方位呈现满山红叶成分的特性，适用因原产地、批号、生长发育自然环境等要素的不一样，发生的品质不均匀一的满山红叶。该方式简单易行，指纹识别峰分离度好，具备较高的真实度，为事后满山红叶的科研开发设计给予科学论证。