黑果腺肋花楸别名不老莓、野樱莓，属被子植物门绿色植物。营养丰富，果子中含有原花青素、花青素及其黄酮类等各种作用成份，具备抗感染、防辐射、降血脂、护肝等作用，与此同时还能消除人体氧自由基。果子既可生吃，也可以生产加工制做保健饮品、水果汁、水果酒和苹果酱等食品类，具备健脾胃行气、养血止咳化痰的功效。现阶段世界各国对黑果腺肋花楸的科学研究非常少，开发设计和运用其作用成份对日后的科学研究至关重要。

花色苷是一类普遍出现于绿色植物身体的水溶的黄酮类化合物、多糖类天然色素，是由原花青素与各种各样糖原产生的糖苷。其中95％的花色苷中都带有六种原花青素，即大花天竺葵黑色素、矢车菊素、飞燕草黑色素、芍药花黑色素、喇叭花黑色素和锦葵黑色素，根据强碱水解反应可将原花青素转换成6种普遍花色素中的一种或几类。原花青素具备极强的抗氧化，可以消除人体内的氧自由基，抑止肝脂类的过氧化物状况，并展现一定的量效关联，可以阻拦臭氧对DNA、蛋白、脂类和别的分子伴侣的危害，消除有毒的氧自由基，因而具备防止心脑血管疾病，预防癌症，减轻糖尿病患者，保护视力等作用，如今早已被使用到食品类、药物、保健产品、护肤品等中。现阶段，并未见有关黑果腺肋花楸提取液中钛酸异丙酯矢车菊素成分检测的报导。文中参考有关参考文献，供试品水溶液制取选用加温流回碱化工业甲醇水解反应法，该加工工艺成熟稳定且简易容易实际操作。选用HPLC测定方法黑果腺肋花楸提取液中钛酸异丙酯矢车菊素的成分，为黑果腺肋花楸果的进一步开发设计运用给予实验根据。

一、原材料与方式

1、原材料与实验试剂

黑果腺肋花楸提取液(吉林化工学校有机化学与制药业工程学校试验室自做)；钛酸异丙酯矢车菊素(标准品，HPLC≥98％，成都市曼思特生物技术有限责任公司)；工业甲醇、硫酸铵(色谱纯，天津大茂化学药品企业)；水为主纯净水；其他常用实验试剂均为国内分析纯。

2、仪器设备与机器设备

LC-2000型高效率液相色谱(大连市依利特分析仪有限责任公司)；W5-100SP型恒温水浴锅(上海市申生高新科技有限责任公司)；FA-2004N型电子器件电子分析天平(上海精密科学研究仪有限责任公司)；KQ250DE超声波清洗器(昆山市超声波仪器设备有限责任公司)；TU-1950双光束紫外线由此可见光度计(北京市普析通用仪器设备有限责任公司企业)；T-50溶剂过滤器(天津实验仪器有限责任公司)；RE-52AA无油真空泵(天津津腾实验仪器有限责任公司)。

3、方式

（1）黑果腺肋花楸提取液中钛酸异丙酯矢车菊素的HPLC成分测定法

①色谱仪标准离子交换柱为大连市依利特ODS2C18(4.6ininx250mm，5um)；流动性相：A为工业甲醇，B为0.2％硫酸铵溶液(W)，程序流程为0～30min，40％A；流动速度：0.8mL／min；柱温：30℃；进样量：20皿；检验光波长为276am。

②标准品水溶液的制取高精密称量干躁至恒重的钛酸异丙酯矢车菊素标准品1.80mg，放置50mL的容量瓶中，用2％硫酸工业甲醇融解并滴定剂至标尺，混匀，配置成浓度值为0.036mg.mL^-1的标准品水溶液，放置电冰箱中遮光储存预留。

③供试试品溶剂的配制方式

称量干躁至恒重的黑果腺肋花楸提取液1g，放进圆底烧瓶中，添加2％的硫酸甲醇溶液30mL，放置90℃水浴中流回1h，制冷至室内温度，混匀，过虑，将渗沥液迁移至50mL容量瓶中并且用2％的硫酸甲醇溶液稀释液至标尺，混匀，用微孔滤膜(O.22μm)滤过，取续渗沥液，做为供试品水溶液。

④流动性相的挑选

实验中关键考查了工业甲醇-0.2％硫酸铵溶液、乙腈-0.2％硫酸铵溶液、工业甲醇-3％苯甲酸溶液等各种各样流动性相对性黑果腺肋花楸提取液中钛酸异丙酯矢车菊素保存期和分离度的危害。

⑤线性相关调查

汲取钛酸异丙酯矢车菊素的标准品水溶液，配置成浓度值分別为3.6、7.2、14.4、21.6、28.8、36.0μg·／mL的系列产品标准品水溶液，各自气相20μL，测量钛酸异丙酯矢车菊素的峰总面积。以OD值钛酸异丙酯矢车菊素的峰总面积为纵轴，浓度值C为横轴制作标曲，得线性回归方程Y=37486C 3.2127，R=0.9995(n=6)。结果显示钛酸异丙酯矢车菊素气相浓度值在3.6～36.0μg·mL^-1范畴内与峰总面积线性相关优良。

⑥可重复性实验

取同一批号黑果腺肋花楸提取液6份，称量干躁至恒重的黑果腺肋花楸提取液1g，放进圆底烧瓶中，添加2％的硫酸甲醇溶液30mL，放置90℃水浴中流回1h，制冷至室内温度，混匀，过虑，将渗沥液迁移至50mL容量瓶中并且用2％的硫酸甲醇溶液稀释液至标尺，混匀，用微孔滤膜(O.22μm)滤过，取续渗沥液，做为供试品水溶液。各进样量20μL，测量钛酸异丙酯矢车菊素的峰总面积。钛酸异丙酯矢车菊素峰总面积各自为602.18、612.34、616.52、621.13、629.28、613.52，RSD为1.54％，结果显示成分测定法具备不错的可重复性。

⑦仪器设备精度实验

汲取标准品及供试品水溶液，持续气相6次，每一次气相20μL，各自测量标准品及供试品水溶液中钛酸异丙酯矢车菊素的峰总面积。供试品中钛酸异丙酯矢车菊素峰总面积各自为624.23、623.84、631.37、645.85、623.59、611.80，RSD为1.79％。标准品中钛酸异丙酯矢车菊素峰总面积各自为1065.54、1140.96、1122.17、1097.34、1093.65、1138.23，RSD为2.65％，结果显示仪器设备精度符合规定。

⑧供试品水溶液的可靠性实验

汲取供试品水溶液，各自于0、2、4、8、12、24h气相20μL，测量钛酸异丙酯矢车菊素的峰总面积。供试品中钛酸异丙酯矢车菊素峰总面积各自为617.32、634.17、618.97、630.15、631.22、625.34，RSD为1.09％，说明供试品水溶液在常温下24h内平稳，达到测量规定。

⑨检出限与定量限实验

汲取标准品水溶液适当，逐渐稀释液，直至检验基线噪声为基线噪声的3倍才行，测算钛酸异丙酯矢车菊素的最少检验浓度值，实验结果显示钛酸异丙酯矢车菊素的最少检出限为0.360μg／mL。汲取标准品水溶液适当，逐渐稀释液，直至检验基线噪声为基线噪声的l0倍才行，测算钛酸异丙酯矢车菊素的定量限，实验结果显示钛酸异丙酯矢车菊素的定量限为0.144μg／mL。

(2)供试品水溶液制取方式的提升

①正交实验

依据单要素实验結果，基本上精准定位了功效于原花青素水解反应的三个因素，各自为水解反应溫度、反应速度和酸浓度值。挑选水解反应溫度、反应速度、酸浓度值做为调查要素，按三要素三水准开展实验，要素水准表见表1。

②工艺验证性实验

称量黑果腺肋花楸提取液3份，每一份0.5g，放进圆底烧瓶中，添加3％的硫酸甲醇溶液15mL，放置100℃水浴中流回120min，制冷至室内温度，混匀，过虑，将渗沥液迁移至25mL容量瓶中并且用3％的硫酸甲醇溶液稀释液至标尺，混匀，用微孔滤膜(0.22μm)滤过，弃去初渗沥液，取续渗沥液做为供试品水溶液。离子交换柱为大连市依利特ODS2C18(4.6inin×250mm，5μm)；流动性相：A为工业甲醇，B为0.2％硫酸铵溶液(V/V)，程序流程为0～30min，40％A；流动速度：0.8mL／min；柱温：30℃；进样量：20μL；检验光波长为276nm。各自气相20μL，测量钛酸异丙酯矢车菊素的峰总面积，测算钛酸异丙酯矢车菊素的人均成分及RSD值，明确正交实验所选定的溶解标准的可靠性。