1.2.5 纤维素酶魅力的测量

分离出来菌种注射至LB液体培养基中，37℃塑造24h，连续传代至第三代时获得发酵物，离心式取上清液，即是菌种的粗酶液。CMC（羧甲基甲基纤维素）测定方法菌种生产纤维素酶的魅力。纤维素酶魅力界定为1mL酶液在50℃标准下1min水解反应羧甲基甲基纤维素造成1μg葡萄糖水即是一个酶魅力企业（U/mL）。
 

在其中：m：从标曲线性回归方程测算得的葡萄糖水mg数；n：酶液稀释倍数；0.5：测量时汲取稀释液酶液mL数；30：表明反应速度分鐘数。

2 結果与探讨

2.1 纤维素酶活力菌种的挑选

从9个试品中国共产党分离出来出21株菌，所有 为革兰氏阳性病菌，经CMC-Na固体培养基塑造，刚果红染色液上色挑选，在其中有5株病菌可在CMC-Na固体培养基上产生全透明圈菌体，結果如图所示1所显示。W1和W2菌种，来自纳豆激酶试品W，R菌种来自纳豆激酶试品R，F3菌种来自水豆豉试品F，FS来自水豆豉试品FS。在其中，以F3菌种水解反应CMC-Na的能力最强，即纤维素酶活力最大，FS菌种的活力最少。因而，选择来自发醇水豆豉的F3菌种做进一步科学研究。

2.2 菌种的评定

2.2.1 组织学特点

F3菌种于LB固体培养基中37℃塑造24h，菌体及革兰氏染色观查結果如图2所显示。F3菌种可在LB固体培养基上产生奶白色、不全透明、边沿不规律的环形菌体，表层光洁，突起，材质粘稠金属拉丝。菌细胞为革兰氏染色呈阳性，呈短杆状，两边钝圆，单独排序，可产生显著的芽胞。

2.2.2 16SrDNA基因序列剖析

F3菌种的16SrDNA遗传基因经转录组测序得到编码序列长短为1437bp，根据BLAST剖析，发觉菌种F3与枯草芽孢菌属开放阅读框最大，接着将其与枯草芽孢菌属内方式菌种的16SrDNA基因序列开展多序列比对剖析，与此同时并以同为的Escherichiacoli方式菌种为外标，并运用NeighborJoining法搭建系统发育树，結果如图所示3所显示。

由16SrDNA遗传基因序列比对剖析得知，F3菌种与Bacillusamyloliquefacienssubsp.amyloliquefaciens、Bacillusamyloliquefacienssubsp.plantarum2个方式菌种的亲缘关系近期，但2个方式菌种的16SrDNA基因序列经两端对齐核对剖析发觉二者开放阅读框超过99.5%，故没法判断F3菌种实际种的所属。针对亲缘关系较近的种间评定仅根据16SrDNA基因序列剖析是没法达到的，需在其根本上凭借别的特殊看门基因序列搭建系统发育树开展协同剖析，如gyrA、gyrB、recA、pheS、rpoA等。

2.2.3 gyrB基因序列剖析

为了更好地进一步评定F3菌种，对其gyrB遗传基因开展了PCR扩增及转录组测序，得到 了gyrB遗传基因的一部分编码序列，长短为1115bp。将该菌种的gyrB基因序列同已经知道枯草芽孢菌属内不一样方式菌种的gyrB基因序列开展对比剖析，一样并以同为的Escherichiacoli方式菌种为外标，制作根据gyrB遗传基因的系统发育树，如图4所显示。

解木薯淀粉枯草芽孢菌绿色植物亚种与解木薯淀粉枯草芽孢菌解木薯淀粉亚种的gyrB基因序列开放阅读框仅约为96%，而根据gyrB序列比对剖析发觉F3菌种与解木薯淀粉枯草芽孢菌绿色植物亚种亲缘关系更近。因而，根据16SrDNA和gyrB遗传基因序列比对剖析，可将F3菌种评定为解木薯淀粉枯草芽孢菌绿色植物亚种。