目地:创建HPLC法一起测量引阳索中五味子醇甲、五味子乙素的成分。方式:选用AgilentExtendC18(250mm×4.6mm,5μm)离子交换柱;以工业甲醇-乙腈-0.1%硫酸铵水溶液为流动性相,流动速度为1.1mL·min-1;梯度方向过柱;气相量为10μL;检验光波长为250nm;柱温为32℃。結果:五味子醇甲、五味子乙素的线形范畴各自为7.013~175.3mg·L-1(r=0.9998,n=7)和7.040-176.0mg·L-1(r=0.9998,n=7);获取利用率:五味子醇甲96.05%(RSD=0.7%,n=6),五味子乙素96.48%(RSD=0.9%,n=6)。结果:此方法实际操作专属性强、迅速、简单、結果精确,可用以引阳索的质量管理。
引阳索载于于《中华人民共和国卫生部药品标准》中药材成方中药制剂第三册,由霪羊霍中药浸膏与五味子中药浸膏按2∶1混和做成片剂,具备壮阳补肾,生津止渴作用,用以阳萎早泄,腰酸腿软,津亏自汗,头晕眼花等症。执行标准中缺乏对药方中五味子中药浸膏质量管理的方式 ,谭文明行为和孟淑智依次报导了引阳索中五味子中药浸膏指标值成份五味子甲素和五味子醇甲的TLC识别方法,现阶段暂未有引阳索中五味子中药浸膏指标值成份五味子醇甲和五味子乙素成分检测的报导,文中构建了与此同时测量引阳索中五味子醇甲和五味子乙素的成分方式,本科学研究专属性强,可用以引阳索中五味子中药浸膏的质量管理。
1仪器设备
Waters2695高效率液相色谱(包含工作平台、自动进样、柱温箱、2998型二极管列阵探测器英国Waters企业),XPE205电子分析天平(METTLERTOLEDO企业),超声波清洗机(HT300输出功率:40KHZ济宁市盛通超声电子机器设备),超纯水机(Milli-QAdvantageA10默克密理博企业)。
2原材料
五味子醇甲标准品(生产批号110857-201010成分99.4%)、五味子甲素标准品(生产批号110764-201010成分99.6%)、五味子乙素标准品(生产批号110765-200710)均购自中国药品生物制药检定所,引阳索药物3批(生产批号:20170704,20180604,20191103,市面上),霪羊霍(生产批号:1910001,安国市聚药堂医药有限责任公司),超纯水系统(自做),别的实验试剂(色谱纯,市面上)。
3方式和結果
3.1色谱仪标准与系统软件适用范围实验
离子交换柱:AgilentExtendC18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动性相:工业甲醇(A)-乙腈(B)-0.1%硫酸铵水溶液(C),梯度方向过柱:0~24min为35%~55%A,30%~30%B;24~27min为55%~35%A,30%~30%B;27~30min为35%~35%A,30%~30%B;检验光波长:250nm;流动速度:1.1mL·min-1;进样量:10μL;柱温:32℃。五味子醇甲、五味子乙素与邻近色谱仪峰的分离度均超过1.5,基础理论板数均不少于5000。
3.2水溶液的制取
3.2.1对比贮备液
取P2O5干躁13h的五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素标准品,各自高精密称量14.11mg、16.62mg、14.08mg置20mL量瓶中,加工业甲醇适当,超声波使融解,用工业甲醇稀释液至标尺,做为标准品贮备液(五味子醇甲701.3mg·L-1,五味子甲素827.7mg·L-1,五味子乙素704.0mg·L-1)。各自高精密量取1mL,置同一10mL量瓶中,用工业甲醇稀释液至标尺,得混和标准品水溶液。
3.2.2供试品水溶液
取供样品5袋,高精密秤重,研细,高精密称量5g(等同于1袋),置100mL具塞锥形瓶中,加摩尔分数75%甲醇溶液50mL,密塞,秤重,超声波获取30min;置放至室内温度,称取净重,用以上甲醇溶液补充减失净重,用0.45μm微孔滤膜过虑,预留。
3.2.3阴性对照水溶液
按引阳索药方,不用五味子中药浸膏,按“3.2.2”条方式制取阴性对照水溶液。按“3.1”条色谱仪标准气相,纪录色谱见图1。
3.3线性相关调查
先后高精密量取五味子醇甲、五味子乙素标准品贮备液各0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL,各自置10mL量瓶中,用工业甲醇稀释液至标尺,混匀,得不一样浓度值系列产品混和对比水溶液。按“3.1”条色谱仪标准,气相10μL,以峰总面积(Y)对浓度值X(mg·L-1)开展多元回归分析,得:五味子醇甲线性回归方程Y=2.062×104X-7.829×104(r=0.9998,n=7),在7.013~175.3mg·L-1内,五味子醇甲线形优良;五味子乙素线性回归方程Y=1.543×104X-6.039×104(r=0.9998,n=7),在7.040~176.0mg·L-1内,五味子乙素线形优良。
3.4精度实验
取五味子醇甲、五味子乙素混和标准品贮备液,用0.45μm微孔滤膜滤过,按“3.1”条色谱仪标准,持续气相5次,每一次10μL,测得五味子醇甲峰总面积各自为1386130、1413230、1416601、1409903、1398858,RSD为0.9%(n=5);五味子乙素峰总面积各自为1039735、1068231、1064348、1059376、1053065,RSD为1.1%(n=5),结果显示仪器设备有优良的精度。
3.5可靠性实验
取引阳索颗粒物适当,按“3.2.2”条方式制取供试水溶液,先后在0、2、6、10、18、24、48h,反复气相,每一次10μL,测得五味子醇甲峰总面积各自为1439032、1428035、1419366、1418367、1421035、1416534、1403982,RSD为0.8%(n=7);五味子乙素峰总面积各自为505762、504927、506354、498756、492769、503262、491965,RSD为1.2%(n=7),结果显示试品在48h内平稳。
3.6可重复性实验
各自高精密称量同一批引阳索(生产批号20180604)5份,按“3.2.2”条方式制取供试水溶液,精确测量五味子醇甲成分各自为3.63、3.68、3.67、3.69、3.64mg/袋,RSD为0.7%(n=5),五味子乙素成分各自为1.82、1.81、1.79、1.83、1.84mg/袋,RSD为1.0%(n=5),结果显示方式可重复性优良。
3.7利用率实验
各自高精密称量已经知道成分的引阳索(生产批号20180604)约2.5g,6份,各自置100mL锥形瓶中,各自高精密添加对比水溶液:五味子醇甲对比水溶液(0.9165mg·mL-1)、五味子乙素(0.9118mg·mL-1)、各2.0、1.0mL,按“3.2.2”条方式制取供试水溶液,气相10μL,結果测得五味子醇甲、五味子乙素均值利用率各自为96.05%(RSD=0.7%,n=6)、96.48%(RSD=0.9%,n=6),結果见表1。
3.8试品的含量测量
取引阳索10袋,按“3.2.2”条方式制取供试水溶液,平行面3份。按“3.2.1”条方式制取标准品水溶液,按“3.1”条色谱仪标准,气相10μL,用外标法测量3批引阳索试品中五味子醇甲和五味子乙素的成分,結果见表2。
4.1测量光波长的挑选
宣东公平报导了五味子醇甲和五味子乙素与此同时监测的光波长为254nm,《中国药典》2015版五味子成分检测项下测量五味子醇甲的光波长为250nm,综合性考虑到被测化学物质较大消化吸收光波长、消化吸收抗压强度,最后选中250nm做为检验光波长。
4.2流动性相的挑选
流动性相较为了工业甲醇-0.1%硫酸铵水溶液(35:65)、乙腈-0.1%硫酸铵水溶液(30:70),发觉被测成份能够 做到基准线分离出来,但五味子乙素保存期超出60min,与杨志向等科学研究結果同样,最后挑选工业甲醇-乙腈-0.1%硫酸铵水溶液三元系统软件为流动性相,梯度方向过柱,流动性相根据引进乙腈减少被测化学物质保存期,线形调节工业甲醇和0.1%硫酸铵水溶液占比使3种木脂素与其它化学物质合理分离出来,結果试品中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分离出来效果非常的好,没有杂质影响,且出峰快,保存期各自为五味子醇甲5.18min、五味子甲素16.88min、五味子乙素20.35min。
4.3成分测量指标值挑选
任伟光等报导了五味子醇甲、甲素、乙素是五味子中关键木脂素类物质,有保护肝脏、神经中枢抑止、降血糖、抗感染等药用价值。马莹慧等报导了五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素为指标值的成分统计分析方法,李宝等报导了五味子中药浸膏中五味子醇甲、甲素、乙素的含水量测定法,本研究发现引阳索试品色谱中五味子甲素色谱仪纷纷总面积较小,因而本篇文章仅挑选了五味子醇甲和五味子乙素两个指标值开展成分测量。五味子甲素色谱仪峰可做为特点峰之一,用以引阳索中五味子中药浸膏的判定辨别。