1.3 莹光免疫力分析方法

莹光免疫力分析方法（Fluorescence Immunoassay,FIA）是用荧光素标识抗原开展抗原和抗体反映，以抗原的非特异反映再加上莹光化学物质的示踪剂，来做到被测抗原体化学物质在机构或体细胞内的判定和精准定位。常见异硫磺酸基荧光素（FITC）为标识物，当标识抗原与抗原体非特异融合后，在抗原体的精准定位处可表明出莹光，在光学显微镜下展现光亮的非特异莹光。此方法可验出原来在一般的组织切片或玻片中无法察见的一些特别成份或抗原体，由病毒学技术性再加上示踪剂技术性并融合组织学的查验，使非特异的检验、评定和抗原体精准定位一次进行。这类以莹光化学物质标识抗原而开展抗原体精准定位的工艺称之为莹光抗原技术性（Aluorescent Antibody Technique）。其基本上办法有立即法、间接性法、补体结合法和双标识法四种。

Sheng Wei等研发了一种莹光免疫测定法（FIA），以Zn Cd Se/Zn S量子点技术（QD）当做莹光标识，金纳米颗粒（Au NPs）当做淬灭剂。该测量以“打开”方式开展，即莹光数据信号（在302/525nm激起/发送光波长下最好精确测量）随剖析物含量的提高而提升。该测定方法能够 一起检验四环素抗菌素，包含四环素、土霉素、金霉素和强力霉素，且不会受到别的饲料的影响。四环素类抗菌素的检测机極限（LOD）为缓冲溶液中2μg/L，牛乳中20μg/L和小动物肌纤维中40μg/L。测量（包含试品解决）能够 在30min内开展。根据“开启”方式的FIA比应用Au NPs或QD做为数据信号标识的胶体金基免疫力色谱（CGICA）和根据“关闭”方式的量子点技术免疫力色谱（QDICA）更加灵巧。一个杂带能够 根据在紫外线下的QD发亮猝灭与此同时以“开启”方式给予莹光检测結果。色度检测归属于“关掉”方式，该方式根据在太阳光下应用Au NPs而产生鲜红色。应用这类双系统测试方式能够 迅速半定量测量牛乳和机构试品中的四环素抗菌素。

Song Erqun等融合了根据多色量子点技术（QD）的免疫荧光测定方法和列阵统计分析方法，以完成牛乳中氨苄青霉素（SM）、四环素（TC）和青霉素钠G(PC-G）的与此同时，灵巧和数据可视化检验。将SM,TC和PC-G的抗原（Ab）与具备不一样发送光波长（QP(520nm）、QD(565nm）和QD(610nm））的QD偶联反应，以作为检验探头（QD-Ab）。随后，根据QD-Ab探头的莹光，在抗原体被子的少量滴定管焊接螺栓中开展立即竞争莹光免疫测定，以与此同时判定和定量分析检验SM、TC和PC-G残余。SM、TC和PC-G的线形范畴各自为0.01～25ng/m L、0.01～25ng/m L和0.01～10ng/m L，每一种的检验極限均为5pg/m L。依据QD-Ab探头的莹光，估测并与此同时确认了三种抗菌素的含量。与商业化的酶联免疫吸咐测定试剂盒对比，此方法能够 在一次运作中与此同时剖析好几个试样中的多种多样总体目标抗菌素（高通量测序剖析），并增强了剖析正宗牛乳中三种抗菌素残余的准确度和敏感度，预估此方法能够 在缓解残余抗菌素对人们身体健康和生态体系的不良影响层面起到主要功效。

1.4 胶体金免疫力分析方法

胶体金免疫力分析方法(Gold Colloid Immunoassay,GIA）是以胶体金做为示踪剂标识物运用于抗原和抗体的一种免疫力标记技术。其具体机理是使用在可见光波长范畴内有较强消化吸收效用的金纳米颗粒来标识抗原体或抗原开展免疫测定。与金标抗原体或抗原融合的被测分子结构将被金颗粒“上色”。该工艺具体包含胶体金免疫力组织化学技术性和胶体金免疫测定技术性二种种类。1971年由Faulk与Taylor最先将胶体金免疫力关键技术于免疫力透射电镜技术性，现阶段不但运用于免疫力透射电镜和电镜精准定位检验，并且在抗原体或抗体检测、兔疫转印纸技术性流式细胞术及高端芯片等检测中也是有广泛运用，具备简单、迅速、安全性等特性。

Shi Qiaoqiao等创建了以胶体金（Au NPs）与抗新霉素的单抗（NEO-m Ab）和拉曼光谱探头分子结构4-羟基硫酚（PATP）偶联反应制取的免疫力探头测量新霉素（NEO）的方式 。该办法的一半抑止浓度值（IC50）和检验低限（LOD）各自为0.04ng/m L和0.216pg/m L。该测定方法与其它化学物质沒有交叉式反映性，说明该测定方法具备很高的非特异。加上了NEO的牛乳试品的利用率在89.7%～105.6%的范畴内，相对性相对标准偏差（RSD）为2.4%～53%(n=3）。结果显示，该办法有着较高的非特异、敏感度、再现性和可靠性，可用以牛乳试品中多种多样抗菌素残余的检验。

赵福民[33]等制做了可以另外检验牛乳、婴儿奶粉中卡那霉素、罗红霉素、林可霉素三种抗菌素的胶体金免疫力层析试小纸条。那菌素、罗红霉素、林可霉素检出限各自为50.0、20.0和75.0μg/L，假阳性率和假阴性率均为0，样版不用前解决，检验实际操作简易，10min内完成3种药品与此同时检验。选用胶体金试小纸条和液相色谱仪串联质谱法对20份牛乳和婴儿奶粉盲样开展对比实验，呈阳性试品所有验出，2种方式测量結果一致。数据显示，该法检验精确靠谱，适用当场大批样版的快速检测和挑选。

1.5 流动性注入免疫力分析方法

流动性注入免疫力分析方法[34](Flow-Injection Immunoassay,FIA）是一种全自动程度高的免疫力分析方法，它还可以由计算机系统控制缓冲溶液的流动速度、自动进样、探测器的监测及数据分析等，可对临床医学微生物试品、低分子结构药品含量的临床医学检测及自然环境污染物质，如化肥、饲料以及新陈代谢产品的成分开展测量。FIA可分成均相和非均相二种，前面一种不涉及到分离出来流程，但因为试品中杂物对测量的影响较为重，故在应用上得到了一定的限定；后面一种则必须用固相媒介将融合的和未融合的标识物分离，那样就能完全的将未融合的标识物和试品中的残渣成份迅速去除，提升 了检查的精确度和可重复性。

Luo Liegao[36]等创建了一种根据金纳米颗粒酶的简易、超灵巧的流通注入电化学发光竞争免疫力统计分析方法，用以检验虾和纯蜂蜜中的氯霉素（CAP）残余。以具备优良的相容性和很大的堆积密度的羧基环氧树脂珠做为固相媒介，以固定不动大量的包被抗原（Ag）。

除此之外，金金纳米颗粒能够 给予一个合理有效的栽培基质，以加载更多的CAP抗原和辣根乳酸脱氢酶，这将合理地催化反应鲁米诺-对碘甲酸（PIP)-H2O2系统。应用该法检验CAP，在其中试品中的CAP将与被子Ag市场竞争比较有限的抗原，造成 电化学发光（CL）数据信号随CAP浓度值的提高而减少。在提升情况下得到了0.001～10ng/m L的宽线形范畴（R2=0.9961），测算出的方法检出限（3sigma）为0.33pg/m L。该方式也已取得成功地用以测量虾和纯蜂蜜试品中的CAP。本探究指出的免疫力感应器不但具备精确度高、线形范畴宽、可靠性比较满意的优势，并且增加了流动性注入电化学发光免疫测定在抗菌素检测中的运用。

1.6 放射免疫分析方法

放射免疫分析方法[37](Radioimmunoassay,RIA）是一种将放射性物质放射性核素精确测量的高宽比敏感度、准确性和抗原和抗体反映的非特异紧密结合的身体之外测量超少量（10-9～10-15g）化学物质的新技术应用。RIA法的优势[38]：具备一般统计分析方法所不拥有的高敏感度，最少方法检出限能低至拉克（ng,10-9g）～飞克（fg,10-15g）；抗原和抗体的高非特异决策了RIA法的高非特异，如氯霉素类抗原只有与氯霉素抗原体融合；此外，该法还具备方式简单、便捷、便于自动化技术、有利于宣传等优势。

Araby Eman等创建了测量牛羊肉中四环素（TE）和借助菌素（ST）的放射免疫分析方法，并分离出来和评定了相应的高抵抗性病菌菌种。除开科学研究γ放射线对该类耐药菌对TE和ST的敏感的危害外，在全部搜集的试品中都检验到四环素（TE），而ST在肉类食品和肾脏中的诊断率各自为38.46%(5/13）和87.5%(7/8）。各自从肉类食品和肝部试品中分离出来出5一个病菌分离出来株，在其中对TE或ST抗药性最大的分离出来株被检测为长鞭虫属的链球菌感染、奇特沙门菌（两个分离出来株）和大肠埃希菌（3株）。

SU Ming-Ming选用CharmⅡ放射免疫测定方法牛血清中的磺胺类药物残余。搜集6份血清蛋白试品开展加样实验，将试品检测的结论与对比点实现较为。评定了免疫反应系统软件的敏感和非特异。将精确测量值与基准点开展较为，假如检测值超过基准点，则试品为呈阴性；而假如检测值低于基准点，则试品为呈阳性。結果可在短期内得到 检测結果，四环素的方法检出限为20μg/kg。该办法具备极度的非特异，实际操作简单。