卷心菜别名赤洋白菜、红洋白菜，归属于十字花科，芸薹属洋白菜种的一个变异。十字花科绿色植物之中带有比较充足的多酚类物质，卷心菜中的多酚类主要是原花青素，原花青素在绿色植物身体关键以糖苷的方式存有，卷心菜中的花色苷类物质关键为矢车菊黑色素的糖苷。原花青素有着抗氧化性、防癌和降血脂等人体生理活力，与此同时卷心菜原花青素在酸碱性到中性化范畴内能够 保持色调由红到紫的变化，能够普遍使用于糖块、饮品等食品生产之中，因而将卷心菜原花青素开发设计变成食用添加剂具备很高的社会价值和经济收益。

双水相提纯是一种新式的成分分离出来技术性，与传统式分离出来方式对比，具备标准柔和、商品活力损害小、分离出来流程少、无有机溶液残余、实际操作简便等优势，世界各国广泛运用于蛋白的提纯和抗菌素的获取，近几年来慢慢运用于天然色素的分离纯化科学研究，中国针对应用双水相提纯提纯卷心菜黑色素的分析相比较少，海外有相应的报导，但尚未对其提纯标准开展提升。

卷心菜黑色素生产制造时，粗提液中包含大量的的糖原残渣，巨大地危害了色素沉着的质量和可靠性。传统式工业生产针对绿色植物原花青素的获取关键选用酸浸水说法、有机溶剂法，也有超音波法。花色苷水溶液中包含大量的的单糖、二元糖、低聚木糖和含糖量等残渣。现阶段，柱色谱仪、快速倒流色谱仪和孔眼吸附树脂广泛运用于原花青素的分离出来、提纯，能够完成黑色素与其说糖原成分的分离出来，但与双水相提纯对比，成本费较高、時间较长、对操控规定严苛。因而应用双水相提纯的办法完成绿色植物原花青素与其说糖原残渣的分离出来归属于一种新式、迅速、成本低的操控方法。本科学研究试着应用双水相提纯技术性，将卷心菜黑色素与糖原化学物质分离出来，根据可选择性指数表现此办法的实效性。

一、原材料和方式

1、实验室仪器

pH211酸度计；TDL-60B低速档大空间离心脱水机；HY-6两层震荡器；752S紫外线由此可见光度计；AR1530分析天平秤。

2、试验原材料

卷心菜；PEG6000配置成400g／L；甲酸为优级纯；别的实验试剂均为分析纯。

3、统计分析方法

（1）卷心菜黑色素归属于花色苷类，依照英国化学工程师研究会（AOAC）对原花青素类天然色素中花色苷总产量的办法完成测量，以矢车菊-3-葡萄糖水苷计。

式中：

OD值A=（A₅₂₀-A₇₀₀）_pH1.0-（A₅₂₀-A₇₀₀）_pH4.5

M：矢车菊-3-葡萄糖水苷的摩尔质量，449.2g／mol；

D：试品贮备液的稀释倍数；

1：激光光路长，cm，检测中选用1cm激光光路长的比色皿；

ε：26900，矢车菊-3-葡萄糖水苷的克分子消光系数，L·mol^-1·cm^-1；

1000：由g计算成mg的变换指数。

（2）应用甲酸-盐酸法对左右看中总糖成分开展测量。

（3）可选择性指数k的测算。

式中：

K_花：原花青素的扩散系数；

K_糖：含糖量的扩散系数；

C_里花：上看中原花青素的浓度值，mg／L；

C_下花：下看中原花青素的浓度值，mg／L；

C_上糖：上看中糖原成分的浓度值，mg／mL；

C_下糖：下看中糖原成分的浓度值，mg／mL。

4、实验方式

（1）卷心菜黑色素粗提液制取

加入适量卷心菜清洗、剁碎，应用果汁机压榨原汁，100目压滤机滤布过虑，3000r／min离心式15min，取顶层清夜冷冻储存，应用前调pH。

（2）双水相管理体系创建

固定不动管理体系品质为30.0g。在50mL离心管架中分別添加一定品质的硫酸铵和PEG6000源液，添加一定品质事先调过pH的黑色素粗提液，放水补至管理体系品质为30.0g，放置震荡器上300r／min于常温下波动10min后取出，载入左右相容积，用容量瓶各自移取左右相水溶液于30mL比色管中。

（3）花色苷成分的测量

高精密汲取左右相水溶液，各自用pH=1.0的氯化钾缓冲液和pH=4.5乙酸钠缓冲液稀释液适度倍率，以纯净水做空缺，各自在520nm和700nm下测吸光度值。测算左右看中花色苷成分，而测算出K_花。在700nm光波长下测量OD值值是为了更好地校准浑浊对检测效果的影响。

（4）含糖量成分的测量

以葡萄糖水为对比，选用甲酸-盐酸测定方法含糖量的成分。线性回归方程为：y=8.1114x-0.0069，R²=0.9983。各自高精密汲取左右相试品封闭液1.0mL于试管婴儿中，添加5%的甲酸水溶液1.0mL，快速添加硫酸水溶液5.0mL，混匀，置放10min后于40℃水浴加热10min，取下后冷水澡5min，以相对应实验试剂为空缺，在490nm处测量OD值，测算获得K_糖。

（5）正交试验设计方案

因为各要素（即硫酸铵质量浓度、PEG的质量浓度、管理体系pH、粗提液质量浓度）中间有互相协同效应，如表1所显示，开展正交试验并剖析，图1中硫酸铵的含量在最大值18%时，可选择性指数较大，因而正交试验设计方案硫酸铵浓度值再次提高，为18%、19%、20%三个水准。

二、結果与探讨

1、单要素试验

（1）硫酸铵的质量浓度对可选择性指数k的危害在50mL离心管架中添加15.0gPEG6000源液，4.2g黑色素粗提液，各自添加3.0g、3.6g、4.2g、4.8g、5.4g硫酸铵，调整管理体系pH为5，双水相提纯結果如图所示1所显示。

由图1得知，伴随着硫酸铵质量浓度的提升，可选择性指数k呈持续上升发展趋势，可选择性指数在硫酸铵质量浓度为18%时到达最大。伴随着硫酸铵质量浓度的提升，提高了左右两相化学物质的分相，提升了上看中原花青素的浓度值，与此同时增强了糖原残渣在下相的成分，提升了对黑色素的提纯水平。