2.4病菌16SrRNA分子结构评定

16S rRNA PCR物质电泳原理結果(图4)说明,从病菌 菌种的DNA模版中增加出尺寸约为1400 bp上下的片 段,合乎预期成果,系列号为MN736843,将基因序列根据NCBI开展同宗核对剖析,数据显示与该编码序列同 源性能比最大的菌种均是豚鼠气单胞菌，将编码序列与已经知道 编码序列搭建系统发育树(图5),能够 看得出,该菌种与豚鼠气单胞菌(A. caviae)聚为一个支系,融合生化实验和革 兰氏上色等結果,可明确该分离出来菌种为豚鼠气单胞菌。

2.5人力感柒

历经人力感柒的罗氏沼虾发生与当然海域生病虾 类似的病症,感柒罗氏沼虾发生鳃丝肿胀,鳃丝表层出 现黑色斑等病症(图6),感柒组到7日内所有身亡，而对 照组沒有发现异常。从人力感柒濒临死亡的罗氏沼虾 肝肝胀机构内再度开展病菌分离纯化，将分离出来菌种再 次开展生理学生化实验及其分子结构学评定等,获得与原分 离菌种同样的研究結果,证实该分离出来菌种为罗氏沼虾病原菌-豚鼠气单胞菌(A.caviae).

3探讨

豚鼠气单胞菌(A.caviae)归属于气单胞菌科.气单 胞菌属，是威协我国水产品养殖小动物身体健康的首要病原菌之一,可以造成 日本鰻鲡(Anguillajaponica).胡子鲶(Clarias fuscus).中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis). 我国 草虾(Penaeus chinensis). 南方地区鲇(Silurus meriordinalis Chen)、中华鳖(Triongxsinensis)等多种多样水产品小动物感柒。此次科学研究从生病的罗氏沼虾身体分离出来出发病 菌，井将获得的优点菌种根据病菌形状观查.革兰氏阳性菌染 色、溶血症实验及其生理学生物化学剖析可判断该分离出来菌 株为豚鼠气单胞菌(A. caniae).其16S rRNA基因序列 搭建进化树,数据显示该分离出来菌种与豚鼠气单胞菌聚 为一族,综合性全部试验结论可明确该分离出来菌种为豚鼠 气单胞菌。应用该分离出来菌种对身心健康罗氏沼虾开展人力 感柒.感柒后的罗氏沼虾主要表现出与当然福泉标准下患 病虾类似的病症,并对感柒后的罗氏沼虾再度开展细 菌分高提纯.获得与豚鼠气单胞菌类似的菌种,进一一步: 证实了该病菌在罗氏沼虾身体的高致病,与此同时也对豚 鼠气单胞菌的病源科学研究材料完成了一定的填补。

对分离出来菌种的身理生物化学特点开展评定,该病菌 对抗霉素、阿拉伯糖、葡萄糖水产酸、蛋白胨水.精氨酸水 解酶、果胶.苯丙氨酸为呈阳性:氯化氢.丙二酸盐.赖氨 酸掉发酶。鸟氨酸脱羧酶。枸缘磷酸盐.V-P .葡萄糖酸盐 为呈阴性,豚鼠气单胞菌的身理生物化学特点存有菌种差别 性，本科学研究分高的豚鼠气单胞菌对枸橼酸盐和蛋白胨 水的评定结论与方式气单胞菌反过来,发生以上差别的 缘故可能是因为饲养自然环境、气候条件.所在位置.宿主 体不一样引起的。现阶段.,在海产小动物中广泛应用抗菌药物 物对病症开展预防，此次分析的药敏试验试验结果显示,该 分离出来菌种对头孢曲松钠.氣菌素、氟苯尼考四环素、多西 环素s种药品高宽比比较敏感,对卡那霉素1种药品轻中度敏 感.对环丙沙星。环丙沙星、罗红霉素.罗红霉素新生儿霉 素.氨苄青霉素.复方新诺明和利福平8种药品耐药性。此次 科学研究結果与已报导的其它种类分高于的脉鼠气单胞菌 的药品敏感度存有一-定差别1,这说明豚鼠气单胞菌 对药品敏感度存有一-定的差别,这也许和不一样的地域。 不一样饲养条件中药品类型及其药品应用水平不一样有关于病菌的评定方式有很多,比如环受体等温过程扩 增技术性.单抗和间接性ELISA法等.16SrRNA在 病菌性染色体的基因中普遍现象,含高宽比传统区城且 分子大小自始至终。根据I6SrRNA基因序列剖析具备简 易、高效率等优势，早已变成病菌评定及其亲缘关系分辨 的一一种合理的专用工具,可是由于I6SrRNA很有可能存有一一些 不清楚的结构域且遗传基因数量比较有限,因此给编码序列的剖析带 来不方便，此次分析对分离出来病菌的16SrRNA遗传基因以及系 统进化树开展剖析,并与生理学生物化学特点和革兰氏染色 等方式紧密结合,从而判定该分离出来菌种为脉鼠气单胞菌， 提升了病菌评定结论的准确度和真实度。

现阶段，已评定的气单胞菌属关键分离出来自人与不一样 的小动物宿主:从生病水生物及其人感柒的创口中分离出来-有的还能在食品中分离纯化获得PPABLOS等 从拉肚子患者.饮用水及其食品类分离出来的气单型菌开展评定﹐ 结果显示,人源气单胞菌和饮水资源气单型菌比较贴近， 表明气单型菌能够 根据水资源散播到人们,进而造成人 癸造成病症P樊海公平*从产生白血病的中国对虾 分离纯化出豚鼠气单胞菌和嗜水汽单胞菌,可是有关 从罗氏沼虾中分开到豚鼠气单胞菌及其以豚鼠气单胞 菌感柒为主导的罗氏沼虾病症的消息较少,罗氏沼虾豚 鼠气单胞菌是不是可以造成 人与别的水生物病发﹐它 与人玄气单胞菌有没有亲缘关系,及其其发病原理均有 特进一步科学研究。因而,中后期还必须进一步开展此病璧 菌的临床流行病学调研，掌握其患病的规律性,并确定其伤害 的目标及其科学研究其致胸原理等,将更有助于对该发病 菌造成的罗氏沼虾病症实现合理的防治,推动罗氏沼 虾产业链的身心健康发展趋势-

抗菌素等药品是维持养鱼业小动物身心健康生产制造以 及病 例治的有效途径。但是因为当今水产市场抗生素 素类型过多,及其服药习惯性不一样，导政渔药应用相对性 错乱,病菌的耐药性状况也越来越严重,因此在海产小动物 中对抗生素药物的选用和应用一定要有合理性,对病 瓯菌揉应用抗菌素等用药治疗,务必参照其药敏试验试验 結果,严苛遵循水产品药品应用的有关要求﹐与此同时还需要注 愈穿行服药及其药品应用浓度值.尽量减少药品的残余， 此次科学研究为罗氏沼虾豚鼠气单厩菌评定及其病虫害劭治 给予一定的参考资料和理论基础-

4结果

本分析从生病的罗氏沼虾中分离出来出一糅病原菌- 豚鼠气单胞菌,并根据对其菌体形状特点.生理学生物化学鉴 定并融合16SrRNA编码序列剖析,可判定该病原菌为豚鼠 气单慰菌.人力感柒试验验证了该病原菌对罗氏沼虾 具备极强的高致病.药敏试验结果显示该病原菌死对头 泡曲松.氯霉素.氟苯尼考.四环素.盐酸多西环素5种药品 高宽比比较敏感,而对环丙沙星.环丙沙星.罗红霉素.阿奇霉 素.新生儿菌素氨苄青霉素.复方新诺明和利福平8种药品 耐药性,因而可参照药敏试验結果对罗氏沼虾豚鼠气单 巍菌应用适宜的药品开展医治﹐以达到最佳医治效 果-水研究室选的环丙沙星和氯霉素仅用于科学研究菌棵 的耐药性，并不可以用来生产制造,面氟苯尼考能够 做为罗氏 沼虾豚鼠气单脱菌的首要医治药品。这也握醒养殖场 和科研生产制造员工在罗氏沼虾饲养环节中,要在我国觉 许药品应用范畴以内,选择最好眩感药品用于开展病 害预防,提升服药的目的性，保证有效谨慎服药,尽可能 降低药品残余.o研笼为进一步讨论罗氏沼虾豚鼠气 单胞菌的评定和预防给予一定的参照.