目地

选用HPLC光波长转换法一起测量喘舒片中硫酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、黄连酸、黄酮类物质、黄连酚、黄酮类物质甲醚的成分。

方式

选用AgilentTC-C18（2）离子交换柱（250mm×4.6mm，5μm），流动性相为工业甲醇-0.1%硫酸铵水溶液，梯度方向过柱，检验光波长各自为245、278、254nm，流动速度1.0mL·min-1，柱温35℃。結果硫酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、黄连酸、黄酮类物质、黄连酚和黄酮类物质甲醚的线形范畴各自为0.92～18.28（r=0.9989）、63.75～1275（r=0.9999）、11.07～221.4（r=0.9996）、6.07～121.40（r=0.9995）、1.20～24.10（r=0.9998）、1.20～24.08（r=0.9994）、2.08～24.16（r=0.9999）、2.89～57.88（r=0.9993）、1.79～35.80（r=0.9997）μg·mL-1；均值加样利用率各自为98.62%、100.02%、99.84%、97.35%、98.38%、98.92%、100.23%、99.84%、97.74%，RSD各自为1.28%、1.61%、0.78%、1.02%、2.57%、1.80%、1.53%、1.29%、2.42%；9种成分在试样中的成分各自为每片8.65×10-3～0.01104、49.460～57.464、0.864～1.883、0.215～0.388、0.0371～0.0866、0.0399～0.131、0.0464～0.0916、0.143～0.327、0.154～0.267mg。

结果

常用方式简单、精确、可重复性好，敏感度高，可用以喘舒片的质量管理。

喘舒片产品质量标准载于于国家卫生部药品标准中药材成方中药制剂第三册（标准号：WS3-B-0636-91），是由升华硫、大黄粉、硫酸克伦特罗和柴胡提取液（以黄芩苷计）构成的中药西药复方制剂，适用漫性急性支气管炎、慢性支气管炎、肺炎，尤其是实喘气性支气管炎的医治。聚瑞黄连具抑菌、消肿、止血方法的功效；升华硫、硫酸克伦特罗能止咳化痰、止咳化痰、清咽，用以预防慢性支气管炎、漫性喘气性急性支气管炎、肺炎等病症造成的支气管痉挛；柴胡提取液清热解毒化湿，尤善清上焦热邪，具抗菌、抗感染、抗超敏反应、减轻哮喘病、解筋挛等功效。诸药相和，做到清肺润肺、止咳化痰清咽的作用。中国有河南省华峰制药业有限责任公司和山东省百维医药有限责任公司俩家喘舒片制造业企业，前面一种选用HPLC法各自对硫酸克仑特罗和黄芩苷开展双组分成分测量，后面一种选用UV法操纵硫酸克仑特罗的成分。参考文献报导中相关喘舒片指标性成份的含水量测量常见于单一药味成份的科学研究，研究组早期曾选用HPLC法一起测量了喘舒片中5种萘醌类成份的成分。中药西药复方制剂的功效是由多组分一同功效的結果，单一成分的定性分析难以达到对中药制剂总体质量管理的目地，为全方位高效地操纵喘舒片的品质，现选用HPLC光波长转换法一起测量喘舒片中硫酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、黄连酸、黄酮类物质、黄连酚和黄酮类物质甲醚等9种成份的成分，为全方位点评喘舒片的总体品质保证了根据。

1试验一部分

1.1仪器设备与试药

1260型高效率液相色谱（英国安捷伦）。硫酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、黄连酸、黄酮类物质、黄连酚、黄酮类物质甲醚等标准品（100072-201503、110715-201619、111595-200503、111514-200403、110795-201007、0757-200206、110756-201512、110796-201520、110758-201013，成分各自为90.5%、93.5%、99.8%、99.8%、98.0%、98.8%、98.7%、99.2%、99.8%）。喘舒片（河南省华峰制药业有限责任公司，生产批号各自为：20180104、20181101、20190802、20191001、20191101；山东省百维医药有限责任公司，生产批号：20190412）；乙腈为色谱纯；硫酸铵为优级纯；水为矿泉水。

1.2方式与結果

1.2.1色谱仪标准与系统软件适用范围的实验

选用AgilentTC-C18（2）离子交换柱（250mm×4.6mm，5μm），流动性相为工业甲醇（A）-0.1%硫酸铵水溶液（B），梯度方向过柱（0～5min、50%A，5～35min、50%～70%A，35～55min、70%～75%A，55～60min、75%～50%A），流动速度1.0mL·min-1，柱温35℃，进样量10μL，检验光波长各自为245nm（硫酸克仑特罗）、278nm（黄芩苷、黄芩素）、254nm（芦荟大黄素、汉黄芩素、黄连酸、黄酮类物质、黄连酚、黄酮类物质甲醚）。

取混和标准品、供试品及各呈阴性试品水溶液各10μL，在以上色谱仪标准下各自气相，纪录色谱（图1）。各被测成份色谱仪峰均能做到基准线分离出来，分离度超过1.5，各成分消化吸收峰的基础理论板数均不少于3.0×103，呈阴性试品水溶液图普表明别的成份对9种待测成份无影响。

1.2.2水溶液的制取

高精密称量硫酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、黄连酸、黄酮类物质、黄连酚和黄酮类物质甲醚标准品适当，置同一量瓶中，加工业甲醇融解并滴定剂，制取各自含18.28μg·mL-1硫酸克仑特罗、1.275mg·mL-1黄芩苷、0.2214mg·mL-1黄芩素、121.4μg·mL-1汉黄芩素、24.1μg·mL-1芦荟大黄素、24.08μg·mL-1黄连酸、24.158μg·mL-1黄酮类物质、57.88μg·mL-1黄连酚、35.80μg·mL-1黄酮类物质甲醚的混和标准品水溶液。

取喘舒片供试品适当，去除薄膜包衣，研细，取1.0g超细粉，高精密称取，置具塞锥形瓶中，高精密添加25mL工业甲醇，密塞，称取净重，超声波获取30min，取下，制冷至室内温度，秤重，用工业甲醇补充减失的净重，混匀，滤过，取续渗沥液做为供试品水溶液。按喘舒片的药方和配制方式，各自制取缺硫酸克仑特罗、缺柴胡提取液、缺大黄粉的呈阴性试品，同法各自做成各呈阴性试品水溶液。

1.2.3线性相关的调查

高精密汲取“1.2.2”项下混和标准品水溶液0.5、1、2、5、8、10mL，各自置10mL量瓶中，加工业甲醇稀释液并滴定剂，制取系列产品浓度值对比水溶液。各自气相测量，纪录峰总面积，以标准品浓度值为横坐标轴、峰总面积为纵轴开展回归分析，得线性回归方程，线形范畴及相关系数r（表1）。

1.2.4精度、可重复性与可靠性的实验

高精密汲取“1.2.2”项下混和标准品水溶液，持续气相6次，测算得硫酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、黄连酸、黄酮类物质、黄连酚和黄酮类物质甲醚峰总面积的RSD各自为1.21%、0.74%、0.48%、1.72%、0.89%、1.51%、0.60%、1.43%、1.83%，说明仪器设备的精度优良。取喘舒片试品（生产批号：20191101），按“1.2.2”项方式平行面制取6份供试品水溶液，各自气相测量，测算得硫酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、黄连酸、黄酮类物质、黄连酚和黄酮类物质甲醚成分的RSD各自为2.23%、1.02%、1.27%、1.74%、2.04%、1.48%、1.82%、2.64%，说明方式的可重复性优良。

取同一供试品水溶液，在常温状态，各自于制取后0、2、4、6、8、12、24h后入样剖析，测算得硫酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、黄连酸、黄酮类物质、黄连酚和黄酮类物质甲醚峰总面积的RSD各自为1.80%、1.49%、1.32%、1.71%、2.33%、1.79%、1.72%、2.03%、2.38%，说明供试品水溶液在24h内可靠性优良。

1.2.5加样利用率的实验

高精密称量成分已经知道的喘舒片试品（生产批号：20191101）粉末状6份，添加等同于试品成分100%的标准品水溶液，按“1.2.2”项方式制取供试品水溶液，各自气相，纪录峰总面积，测算加样利用率。

硫酸克仑特罗、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、芦荟大黄素、黄连酸、黄酮类物质、黄连酚和黄酮类物质甲醚的均值加样利用率各自为99.62%、100.02%、99.84%、97.35%、98.38%、98.92%、100.23%、99.84%、97.74%，RSD各自为1.28%、1.61%、0.78%、1.02%、2.57%、1.80%、1.53%、1.29%、2.42%。

1.2.6试品的含水量测量

取6批喘舒片试品，各自按“1.2.2”项方式制取供试品水溶液，按“1.2.1”项色谱仪标准测量，选用外标法测算一片试品中各被测成分的成分（表2）。

2探讨

在喘舒片药方中，硫酸克伦特罗属少量成份（标识量为一片10μg），柴胡提取液（以黄芩苷计）的基础理论成分为一片60mg，二种成分的含量的极大差别让与此同时测量二者的成分较为艰难。参照药方中一部分被测成分的基础理论成分，并融合试品剖析图普中各被测成分的相应成分，经多次试验探索，最后原文中对比溶液的浓度，在试验浓度值范畴内，9种待测成分的成分均在线性拟合线性回归方程的线形范畴内。曾调查了不一样含量的甲醇溶液及工业甲醇-硫酸（100∶1）做为有机溶剂的超声波获取实际效果。

结果显示：以工业甲醇-硫酸（100∶1）为获取有机溶剂时，液相色谱仪图普残渣峰增加，黄芩素色谱仪峰与邻近残渣峰没法完成基准线分离出来。黄芩苷色谱仪峰消退，黄芩苷为一元弱酸化学物质，与强酸强碱功效具备多名反映点，推断很有可能在酸碱性环镜中发生了酸催化的水解反应。以工业甲醇为获取有机溶剂，超声波获取30min，获取实际效果最好是，色谱残渣峰少，基准线平稳，9个总体目标物与邻近峰均能彻底分离出来，分离度超过1.5。曾调查了工业甲醇-水、乙腈-水、乙腈-工业甲醇-硫酸铵-水、乙腈-硫酸铵-水等流动性相系统软件，最后挑选原文中流动性相系统软件，完成了9种待测成份和邻近残渣峰的优良分离出来。

选用HPLC-DAD在190～400nm扫描仪，数据显示：硫酸克仑特罗的最高消化吸收光波长为245nm，黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素在220、278、318nm均有比较大消化吸收，大黄粉中萘醌类成份在254～265nm有极强的紫外线消化吸收。

因而，原文中选用245、278、254nm做为测量光波长，可完成对供试品水溶液中9种总体目标物的优良分离出来，达到方法学调查的规定。