银杏树做为银杏树科绿色植物唯一活下来绿化植物，有动物活化石之称，其果、叶、根、蜂花粉等均可当药，在其中银杏树叶的提取液有很高的生物活性和不错的功效与作用，可作为草本植物膳食补充剂和绿色植物药品。银杏树叶提取液功效关键聚集在抗氧化性、防癌、释放压力、改进认知功能（记忆能力和专注力）和血液循环系统，防止并治疗耳鸣、脂肪性肝炎肝损害、糖尿病患者、神经系统退行性疾病等。银杏树叶提取液中的生物活性关键得益于黄酮类化合物、多糖类和三萜类，故黄酮类化学物质和三萜类的成分指标值是分辨银杏树叶提取液品质的规范。

银杏树叶以及提取液中黄酮类含量检测方式具体有光度法、近红外光谱仪法、莹光分光光度法、液相色谱仪法、液质联用等，在其中液相色谱仪法具备仪器设备价钱较低、实际操作简易、精确性高、方法检出限劣等优势，在真实中运用较多。大部分HPLC法测银杏树中黄酮类成分时，先水解反应试品，使当中的化合态黄酮类变化为化合态黄酮类，以测到化合态和化合态之和一黄酮类物质成分，来判断其黄酮类物质品质。有很多非法商人运用这一特点，在银杏树叶以及提取液中增加别的含原儿茶醛、山柰酚等较高的化学物质，以实现有关规范中有关银杏树叶提取液黄酮类成分指标值规定，假冒伪劣，对银杏树叶提取液的品质分辨发生了一定的影响，因而必须创建一种测量银杏树叶以及提取液中分散黄酮类成分的方式 。现阶段有关分散黄酮类的科学研究大部分聚集在液质联用等较珍贵仪器设备，HPLC法科学研究较少，如蒲擎宇等以工业甲醇为获取有机溶剂，检验银杏树中原儿茶醛、三奈酚、异鼠李素3种分散黄酮类成分，但该方式用时长，加温流回需6h，有机溶剂耗费大。

文中致力于创建能同测量银杏树叶及提取液中芦丁、原儿茶醛、山柰酚、异鼠李素4种分散黄酮类成分的方式 ，务求减少现场采样，减少耗能。与此同时点评目前市面上银杏树叶提取液中分散黄酮类成分水准，剖析原材料及提取液中间相匹配各分散黄酮类成分关联，以求更强为公司生产制造给予技术服务和服务项目。

一、原材料与方式

1、原材料与仪器设备

芦丁、原儿茶醛、山柰酚、异鼠李素标准物质，均购于sigma企业，纯净度分別为96.6％、99.5％、97.0％、95.0％；硫酸铵、工业甲醇、酒精、超纯水系统，在其中工业甲醇为色谱纯，其他均为分析纯；银杏树叶3批、银杏树叶提取液3批。Waterse2695高效液相（配置紫外线探测器）；恒温水浴锅（配置冷疑流回系统软件）；超声清洗器。

2、实验方式

（1）规范溶液的配制

各自称量芦丁、原儿茶醛、山柰酚、异鼠李素标准物质6.06mg、4.67mg、6.00mg、1.07mg于50mL容量瓶中，用工业甲醇超声波融解后滴定剂，即得0.1212mg/mL芦丁、0.0934mg/mL原儿茶醛、0.1200mg/mL山柰酚、0.0214mg/mL异鼠李素混和标液。

（2）银杏树供试试品液的制取

银杏树叶：银杏树叶原材料破碎筛粉搅拌后，称量5g试品，100mL工业甲醇提纯再补重，搅拌，过0.459m有机化学系滤纸，被测。

银杏树叶提取液：称0.5g提取液于50rIlL容量瓶中，添加小量工业甲醇超声波融解，制冷至室内温度，工业甲醇滴定剂，搅拌，过0.459m有机化学系滤纸，被测。

(3）4种分散黄酮类成分的测算

C_样=S_样×C_标×V×100/（S_标×m_样×1000）式中：C_样为试品中某一成份分散黄酮类成分，％；S_样为试品中相匹配分散黄酮类峰总面积；S_标为相匹配标样峰总面积；m_样为试品称样量，g；V为试品液滴定剂容积。

二、結果与剖析

1、色谱仪标准的提升

根据提升进样量（3μL、5μL和10μL）和过柱程序流程（等度和梯度方向），明确提升后色谱仪标准为：

离子交换柱：AgilentEclipsePlusC18（4.6mm×100mm，3.5μm）柱温：40⁰C；

进样量：5μL；

流动性相：A：0.4％硫酸铵溶液，B：工业甲醇，梯度方向过柱程序流程见表1。

提升后的色谱仪标准下银杏树叶提取液的高效液相图普如图所示1所显示。

2、银杏树叶前解决标准提升0.2在其它标准一定的情形下，单要素试验认证提纯方法、提纯時间、提纯溫度、流回時间对提纯实际效果的危害。

（1）提纯方法的挑选

称量5g原材料，添加100mL工业甲醇，选用超声波提纯和加温流回提纯，较为超声波和流回二种方法提纯实际效果，結果如图所示2所显示。由图2得知，在提纯時间各自为30min、60min、90min时，加温流回提纯银杏树叶总分散黄酮类成分均高过超声波流回方法，故银杏树叶提纯方法选为加温流回。

（2）提纯時间的挑选

称量5g原材料，添加100mL工业甲醇，80℃加温流回提纯银杏树原材料选择原材料，提纯時间各自为0min、5min、10min、20min、30min、60min、90min，比照結果如图所示3所显示。

由图3得知，流回提纯30min时分散黄酮类的結果已保持稳定，增加提纯時间检验結果无显著转变，故提纯時间当选30min。

根据单要素试验认证，提升后银杏树叶中分散黄酮类前解决标准为工业甲醇800C加温流回30min。

3、标曲和线形范畴

对混和标液做2倍梯度方向浓度值稀释液，所得的芦丁、原儿茶醛、山柰酚、异鼠李素线性方程、相关系数r、线性方程见表2。