灰树花（Grifolafrondosa）一种珍贵的药服用细菌，以子囊孢子或菌丝做为服用一部分，具备各种活力作用，如：抗氧化性、降血脂、降低血脂、抗癌、消除重金属超标，而且带有比较充足的生物活性化学物质，如，灰树花含糖量、花青素、谷甾醇类、萜类等活力成份。传统式灰树花固体塑造主要是运用木渣、麦草及其粮食作物副产物做为生长发育栽培基质，灰树花采摘后，菌糠则被丢掉，导致较大的自然资源消耗及空气污染。

开发设计一种新式的灰树花生长发育栽培基质，并彻底使用其发醇栽培基质具备很高的科研使用价值。根据早期的研究将已提升的苦荞麦、薏米仁等各种各样栽培基质的百分比做为灰树花发醇栽培基质开展试验。苦荞麦做为西部地区一种食药同源谷类含有黄酮类化合物，其芦丁成分极高，薏米仁复含薏米仁酯、薏米仁素和充实的木薯淀粉化学物质，二者能够 做为灰树花发醇栽培基质，为灰树花的成长给予碳氮源。

天麻（Rhizomagastrodiae）一种名贵中药，复含天麻素（p-hydroxymethylphenyl-β-D-glucopyranoside，GA）、对甲基苯甲醇（p-hydroxybenzylalcohol，HA）、对甲基苯甲醛（p-hydroxylbenzaldehyde，HBA）、巴利森苷，具备很高的药理学作用。研究组早期实验证实了加上一定百分比的天麻提取液参加灰树花液体深层次发醇可以明显地推动灰树花胞外含糖量的代谢及土壤含水量的提高及其溶解运用天麻成份开展生物氧化。将中药材天麻以不一样比率的增加量参加灰树花的固态发酵，进一步充实和扩展中药材資源与食用菌菌种共发醇及其彼此之间互相影响、生物氧化的科研市场前景及其中药材菌质商品的食品药品使用价值。

1原材料与方式

1.1原材料与实验试剂

灰树花（Grifolafrondosa，菌苗序号：5.404）；天麻，贵州大方；苦荞麦，贵州威宁；薏米仁，贵州兴仁；天麻素标准品、对甲基苯甲醇标准品、对甲基苯甲醛标准品、巴利森苷标准品、芦丁标准品、异槲皮苷标准品；没有水硝酸铝、亚硝酸钠；其他实验试剂均为市面上分析纯

斜坡培养液为土豆葡萄糖水琼脂粉（potatodextroseagar，PDA）培养液

1.2仪器设备与机器设备

BXM-30R型立柱式灭菌锅；SW-CJ-1D型超净工作台；TGL-20M型台式一体机快速冷冻离心机；CTFD-12S型真空泵冷冻式干燥机；恒温培养箱；Agilent1100型高效率液相色谱及探测器、Agilent5TC-C18型离子交换柱

1.3实验方法

1.3.1灰树花固态发酵培养液配置步骤平面图

1.3.2灰树花菌苗塑造方式

1.3.2.1斜坡种籽塑造

从母种试管婴儿中挑菌黄豆粒尺寸真菌块注射于PDA细胞培养皿中间，25℃控温塑造，至真菌爬满全部斜坡，转置4℃储存。

1.3.2.2发醇塑造

培养液成份构成：苦荞粉：4.5g；苦荞麦皮：1.5g；薏米仁：1.5g；麦麸：0.4g；葡萄糖水：0.1g；

天麻粉：天麻烘干处理，超微粉碎机粉碎成天麻粉，过60目筛。各自依照培养液质量浓度的0、10%、20%、30%、40%、50%添加到发醇培养液中参加固态发酵。

将以上原材料搅拌放水，放置灭菌锅中杀菌（121℃、30min），培养液减少到室内温度，连接灰树花菌苗于培养液中，放进恒温恒湿设备恒温箱中开展生长发育发醇12d（25℃）

1.3.3发醇栽培基质的解决

发醇栽培基质在恒温恒湿设备恒温箱中塑造12d后，将其开展真空泵低温干燥，干躁过后的发醇物超微粉并过80目筛，搜集粉末状，放置-20℃标准下储存，做为试验原材料。

1.四分析方式

1.4.1黄酮类物质成分的测量

精准称量0.4g菌粉，添加20mL50%的酒精中，常温下晃动获取1h，8000r/min离心式10min，取上清液，做为被测试品水溶液。选用NaNO2、Al（NO3）3着色法精确测量，黄酮类物质成分以芦丁剂量表明。

1.4.2天麻素、对甲基苯甲醇、对甲基苯甲醛、巴利森苷成分的测量

1.4.2.1色谱仪标准

离子交换柱：Agilent5TC-C18型离子交换柱（250mm×4.6mm，5µm）；过柱程序流程：0~35min（0%~30%B），35~40min（30%~100%B），40~45min（100%~3%B）；流动性相：0.1%的硫酸铵水（D）、乙腈（B）；流动速度：1mL/min；检验光波长：221nm；柱温：30℃

1.4.2.2试品溶液的配制

精准称量0.5g发醇粉末状，添加10mL75%酒精，常温下萃取法12h，8000r/min离心式10min，取上清液，做为被测试品水溶液，依照以上高效液相色谱色谱法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）标准开展天麻素、对甲基苯甲醇、对甲基苯甲醛、巴利森苷成分的测量，将各种各样化学物质的峰总面积带入标曲，获得各种各样化学物质的成分。

1.4.3芦丁、异槲皮苷成分的测量

1.4.3.1色谱仪标准

流动性相：0.02%的硫酸铵水、乙腈；流动速度：1mL/min；检验光波长：360nm；柱温：30℃；等度过柱：V（乙腈）∶V（0.02%硫酸铵水）=20∶80

1.4.3.2试品溶液的配制

精准称量0.5g发醇粉末状，添加10mL工业甲醇，常温下萃取法12h，8000r/min离心式10min，取上清液，做为被测试品水溶液，依照以上HPLC标准开展芦丁、异槲皮苷成分的测量，将各种各样化学物质的峰总面积各自带入标曲，获得各种各样化学物质的成分。

1.5数据处理方法与剖析

全部的信息应用Origin10手机软件绘图，应用SPSS19.0手机软件开展数据统计分析。试验数据信息以均值±相对标准偏差（m±SD）表明（n=3），应用单要素方差分析（ANOVA）和匹配t-检测开展显著性分析，P<0.05表明数据信息具备显著性差异。

2結果与剖析

2.1灰树花固态发酵不一样時间形状及表观构造的转变

图1为灰树花在未加上天麻培养液上生长发育转变。在生长发育7d时，灰树花菌丝基本上布满培养液，且真菌色调洁白，联接高密度，表明灰树花可以在栽培基质上开展常规的生长发育，此类培养液未对灰树花的生长发育造成抑制效果。

图2为发醇组和未发醇组到不一样日数时菌质的表观形状图。由图2得知，在发醇组，伴随着灰树花发酵时间的增加，栽培基质构造造成很多微小的孔隙度，在发醇终点站时，栽培基质从外到内均发生了很大的孔隙度，构造几近溶散，对比于发醇组，未发醇组栽培基质在0~12d的表观构造形状均未出现突出的转变，构造均比较详细高密度。

比照二者栽培基质的表观构造，表明经灰树花发醇，对栽培基质构造发生了明显的溶散功效，根据对栽培基质构造的毁坏，促使栽培基质的营养元素更非常容易进行析出，提升了菌丝与栽培基质的触碰总面积，有益于菌丝能够更好地消化吸收运用营养元素给予自己的成长新陈代谢。