3．1 安全系数评定

大家都知道，水产品养殖中运用的微生物务必 是 安 全 的，对鱼类、虾类不可以有高致病。然 而，从 92 种小动物用益生菌粉商品中分离出来出 123 个益生菌粉菌种，在其中 45 个菌种对抗菌素耐药性，33．7%的益生菌粉商品被肺部感染克雷伯菌等严重危害性命的病原菌环境污染，并且还发觉了炭疽毒素呈阳性的蜡样芽孢链球菌( Bacillus cereus) 菌种，这对海产小动物及人们的身心健康造成极大威协。由此可见，挑选用以水产品养殖的益生 菌 菌 种，开展安全评定为最重要一环。好氧水解酸化池备选菌苗不可以带有一切质粒编号的耐药性遗传基因或基因簇，不造成溶血症圈，不带有发病遗传基因，不转化成毒副作用新陈代谢物质，且必须融合身体的亚急性、漫性毒副作用实验开展认证。

 3．2 菌种鉴定

好氧水解酸化池菌种鉴定方式同基本微生物评定方式相近，包含基本组织学观查、生理学生物化学剖析、16S rＲNA 转录组测序和全高通量测序等。历经菌种鉴定，可得知菌种的种、属等信息内容，这对进一步科学研究菌苗的功能及具体运用带来了主要参照。实际来讲，以饲料添加物方式喂养的菌苗需合乎各个国家要求 的 菌 种 文件目录，如英国食物与药品管理处( FDA) 和英国精饲料操纵高官研究会( AAFCO) 发布的可立即喂养微生物名册( 46 种) 、欧盟国家准予喂养的菌苗文件目录( 72 种) 、在我国《饲料添加剂品种目录》容许加上的微生物文件目录( 35 种) ; 而改进水质自然环境的菌苗现阶段暂未有明文规定，但必须合乎以前所提起的稳定性规定。 

3．3 耐受力评定

益生菌粉可以起到功效的主要因素之一为承受所运用的自然环境，而且可以在效用结构域移栽生长发育，保持较高 的 活 菌 水 平，而 后 才 能 发 挥 功 效( 图 2) 。有别于陆生动物，益生菌作用水产品生物的效用结构域除开小动物肠胃外，也有水环境治理。因而，挑选的备选好氧水解酸化池菌种必须承受所运用的外自然环境，包含溫度、海水盐度和 pH 等，喂养的益生菌粉还需历经胃液、胆盐等的耐受力点评］。一般而言，可以不错达到这一规定的便是采用水塘或水产品小动物胃肠道的原住民有益菌，在科学研究南美洲小红点鲑( Salveli- nus fontinalis) 时发觉，同外源性益生菌粉对比，当地的益生菌粉不容易影响鱼肌肤粘液有益菌，是调整鱼种微生物菌种生态系统更强的挑选; 也发觉，来源于草虾肠胃的乳杆菌可以尽快融入小动物肠胃，并且能抑制病源弧菌的发育繁育; 研究发现，当地菌种越南地区芽胞链球菌( Bacillus vietnamensis ) VCM5、Bacillus vietnamensis VCM8和支气管炎戈登菌(Gordoniabronchialis) VCM12 可明显减少对虾养殖污水中硝酸盐成分，表明出不错的适应能力。除此之外，一些必须在精饲料制作过程中增加的反水质稳定剂中药制剂，还需考虑到规模化水产饲料生产制造的高溫、髙压耐受力，在这样的情形下，运用芽胞胞子很有可能更加适合。 

4 菌苗的复筛

好氧光合细菌的复筛包含: 运用可选择性培养液( selective culture medium ) 测算菌苗脱氮高效率、分辨脱氮种类及其依靠生物学和组学方式科学研究脱氮体制等流程。 

4．1 脱氮高效率科学研究

在好氧光合细菌脱氮高效率的分析中可选择性培养液的秘方同饲养水质的有机化学构成存有差别，如表 1 所显示，可选择性培养液常见氮源为 NH4Cl、 NaNO3 及 NaNO2 等，常见的氮源为琥珀酸钠、三聚磷酸钠、葡萄糖水、绵白糖和凡士林等。殊不知，在水产品养殖水质中常会为有机化学氮源欠缺，并且氮源变成营养丰富的有机化学氮源。挑选培养液的富碳特点在具体的种植条件中非常少存有，水塘饲养自然环境多见低碳环保高氮，有别于工业生产废水能够 附加给予很多便宜有机化学氮源，饲养中很多有机化学氮源的使用也许会导致水产品小动物氧气不足风险性及微生物滋长等现象发生。基 于 此， 直 接 配 制 0． 05 g /L 的 NaNO2 水溶液，并在这其中仅填补 1 g /L 破碎的鱼料及排泄物以仿真模拟水塘中累积的有机化学化学物质，为此光合细菌水塘仿真模拟培养液( pond-simulating denitri- fication screening medium，PSDSM) 开展菌苗挑选，得到了脱氮高效率理想化的好氧水解酸化池菌种 Bacillus subtilis M 7-1，与此同时，街边运用实验确认，该菌种对饲养水塘中的无机物氮也具备较高的溶解率。在有机化学氮( 蛋白胨、尿素溶液) 存有的情形下，科学研究 反 硝 化 细 菌 海 洋 着 色 菌 ( Marichromatium gracile) YL28 脱氮特性，发觉存有有机化学氮源且加上藻类低聚糖后，YL28 对无机物氮的清除工作能力明显提高。由此可见，在光合细菌的挑选环节中，培养液中氮源、氮源的选用及合适的泥龄关联着筛得菌种的脱氮特性，研究发现，大部分好氧光合细菌的较佳泥龄在 8 ～ 10，殊不知，饲养水塘中一般泥龄在6 ～ 8，因而在挑选培养液配置需考虑到这一差别，或在使用中填补缓凝氮源以保证菌苗的脱氮作用。

溫度是水解酸化池全过程的主要主要参数之一，已经有科学研究表明，好氧光合细菌脱氮的适合温度范围为25 ～ 37 ℃。因而，在菌苗挑选的环节中塑造溫度可设置为 28 ～ 30 ℃ ( 表 1) ，但考虑到冷水鱼养殖及秋春时节水质脱氮的必须 ，嗜 冷 ( 10 ～ 15 ℃ ) 好氧光合细菌的挑选也至关重要。研 究 发 现，好氧反水质稳定剂中国台湾假单胞菌( Pseudomonas taiwanensis) 在 15 ℃ 下对磷酸盐的污泥负荷为 100%，具有超低温脱氮工作能力。殊不知，伴随着气温的 降 低，菌苗的水解酸化池高效率也会随着减少;研究表明，在 10 ℃ 标准下，好氧反水质稳定剂孟氏假单胞菌( Pseudomonas mandelii) 同硝化反应和硝化作用有关的基因的表达产生落后和延迟时间。不难看出，塑造溫度的制定必须整体考虑到菌苗适宜标准及所运用的自然环境这 2 层面要素。

海水盐度也危害着好氧光合细菌的脱氮高效率。研究表明，海水养殖的含盐量( 20‰ ～ 35‰) 已能抑制普遍病菌的辅因子并可产生溶菌功效。在水解酸化池层面，研究表明，在高含盐量下，水解酸化池全过程的作用遗传基因 nirK 和 nosZ 的表述进化速率大幅度降低，抑止了病菌的水解酸化池活力。而与此同时，抗盐好氧光合细菌也已经有科学研究报导，从盐枯草芽孢菌属( Halobacillus) 、海源菌属( Idiomarina) 、现大洋芽胞杆菌属( Oceanobacillus) 和枝芽胞菌属( Virgibacillus) 等属种中分刘海筛到水解酸化池嗜盐菌;从青岛市胶州湾海面堆积物中分离出来出 1 株水解酸化池深海嗜盐菌弧菌; 分离出来挑选的 Bacillus sp．可以在 16 g /L 的 NaCl 中开展好氧硝化作用，这种分析对挑选海水养殖中运用的抗盐好氧光合细菌给予根据。