在国家标准GB5009.22—2016方式1：放射性核素稀释液液相色谱仪-串联质谱法的根基上开展了方式提升、改善，创建了制酒原材料及纯粮酒中黄曲霉B1（AFTB1）的统计分析方法。试品经工业甲醇∶水（7∶3）获取后，净化处理封闭液由TritionX-100的PBS改成超纯水系统，粘度缩小、便于根据提纯小柱。流动性相改成工业甲醇和0.02%苯甲酸-2mmol／L乙酸铵，提升 了回应抗压强度。梯度方向过柱，经高效率液相色谱仪分离出来，在ESI共价键方式下扫描仪，开展多反映检测方式（MRM）检验。

结果显示，仪器设备精度优良，不一样浓度值标高效液相对标准误差（RSD%）均<6%；所制作校准曲线线性相关优良，0.05～10µg／L范畴内相关系数r值>0.999；方式定量限为0.05µg／kg，方法检出限<0.01μg／kg，均小于别的检查方式。原材料与纯粮酒的加标回收率都是在90%～105%，彻底符合规定。此方法检出限低、精确度高，提升了公司对AFTB1的严苛监管。

酿造酒原材料具体有高粱米、麦籽、麦子、扁豆等，因制酒原材料使用量很大，酿酒厂一般对原材料大批量选购，开展储存应用，一旦选购原材料存有事故隐患或储存不合理导致发霉，将造成一些对身体危害的霉菌毒素类化合物，在其中黄曲霉B1（AFTB1）对身体健康的伤害较大，为强毒副作用、强致癌物质化学物质，已被世卫组织癌病组织（IARC）纳入一级致癌物。

为了更好地严控黄曲霉对身体的损害风险性，进而保证顾客的安全性，英国、日本、澳大利亚等众多我国已公布了相关黄曲霉较大限定量的要求，在我国GB2761—2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》规范中也規定了粮食作物中的真菌毒素B1的较大限定，凤香型制酒原材料（高粱米、麦籽、麦子、扁豆）中的较大限定各自为10µg／kg、5µg／kg、5µg／kg、5µg／kg。即便如此，但依然存有一定的风险性，因而创建精确、高效率的检查方式至关重要。

现阶段针对黄曲霉的检查办法具体有液相色谱仪-莹光测定法、酶联免疫吸咐筛选法、高光谱检测法、薄层色谱法、放射性核素稀释液液质联用法等。本科学研究创建了制酒原材料及纯粮酒中AFTB1的液质联用（HPLC-MS／MS）测定法。该方式试品前解决较简易、检验高效率、精确度高、检出限更低，进一步达到了顾客对食品卫生安全高些的希望和我国对食品安全检测更严的规定。

1原材料与方式

1.1原材料、实验试剂与仪器设备

试品：原材料（高粱米、麦籽、麦子），制成品酒源自于陕西西凤酒股权有限责任公司。

实验试剂：苯甲酸、乙腈、工业甲醇、乙酸铵（分析纯）、超纯水系统。

实验仪器：高效率液相色谱仪串连质谱仪器，十分天平秤，氮吹仪，免疫力亲和柱。

标准物质：黄曲霉B1（AFTB1纯净度≥98%），放射性核素内标13C17-AFTB1（纯净度≥98%）。

1.2规范溶液的配制

AFTB1规范贮备液：称量AFTB1为1.0mg，用乙腈滴定剂至100mL容量瓶，配置成10µg／mL规范贮备液。

放射性核素内标13C17-AFTB1切削液：精确移取0.5µg／mL的13C17-AFTB10.8mL，用乙腈滴定剂至10mL，配置成40ng／mL的放射性核素内标切削液。

AFTB1系列产品规范切削液：移取AFTB1规范贮备液1.0mL至100mL容量瓶中，用乙腈滴定剂，配置成100ng／mL的AFTB1正中间规范液。再各自移取AFTB1正中间规范液5µL、10µL、50µL、100µL、200µL、500µL、800µL、1000µL至10mL容量瓶中，各自加500µL的40ng／mL放射性核素内标切削液，用原始流动性相滴定剂，配置成含量为0.05ng／mL、0.1ng／mL、0.5ng／mL、1.0ng／mL、2.0ng／mL、5.0ng／mL、8.0ng／mL、10.0ng／mL的全系列规范切削液，过0.22µm滤纸，待上机操作。

1.3仪器设备主要参数标准

高效液相标准：离子交换柱：Shin-packXR-ODSIIIC18（2.0mmI.D*150mmL.，3.0μm）；进样量：10µL；流动性相：A：0.02%苯甲酸-2mmol／L乙酸铵，B：工业甲醇；柱温：40℃；流动速度：0.3mL／min；停留時间：10ms。过柱方法：梯度方向过柱，见表1。

质谱分析标准：扫描仪方法：多级别反映检测（MRM）；离子源：ESI，共价键方式；加温块溫度：450℃；DL溫度：250℃；做雾化气流动速度：3.0L／min；干躁气流动速度：15L／min；离子源插口工作电压 4.5；停留時间：10ms。

1.4实验方式

1.4.1试品获取

制酒原材料：精确称量制酒原材料5g试品于50mL离心管架中，添加250µL放射性核素内标切削液，漩涡震荡搅拌，添加20mL工业甲醇-水（70 30），涡流搅拌，静放30min完用均质器匀质3min，过玻纤过滤纸。精确移取渗沥液4mL添加12mL的超纯水系统，混和匀称，待净化处理。

酒样：称量2g酒样，添加100µL放射性核素内标切削液，添加4mL水，震荡搅拌，待净化处理。

1.4.2净化处理

原材料：待免疫力亲和柱维护流液尽后添加以上水溶液，以1滴／s的水流量根据免疫力亲和柱，流完完用2×10mL超纯水系统渗滤免疫力亲和柱，当然作用力流尽后挤干小柱，精确添加2×0.5mL工业甲醇过柱，加上1mL水挤干，搜集于色度试管婴儿中，过0.22µm有机滤膜，待上机操作。

酒样：待免疫力亲和柱维护流液尽后添加1.4.1中酒样水溶液，当然作用力下滴，流完后加10mL双蒸水渗滤柱头，挤干；加2×0.5mL工业甲醇过柱，加上1mL水挤干，搜集于色度试管婴儿中，过0.22µm有机滤膜，待上机操作。