2.5 病菌素粗提

硫酸铵获取获得的病菌素粗提物对蜡样枯草芽孢菌有显著的抗菌实际效果。用PBS和0.2mol/LNaCl水溶液过柱经硫酸铵获得的病菌素粗提物并各自搜集其过柱液随后干冻。经抗菌实验发觉历经PBS和0.2mol/LNaCl过柱的成分能够比较好地抑止蜡样枯草芽孢菌（图3）。

2.6 三羟甲基甘氨酸-SDS-PAGE电泳原理結果

图4是产病菌素枯草芽孢菌的Ｔricine-SDSPAGE电泳原理結果。因为Ｔricine-SDS-PAGE电泳原理能够比较好地分离出来＜30ku的蛋白质，因而采用3.3～20.1ku的规范蛋白质做对比。与Marker杂带比照得知菌种O在14.4ku上下时有一条比较突出的杂带。菌种19在8ku和18ku上有突出的蛋白质杂带。菌种F则在8ku处、14.4ku上下均发生显著的杂带。菌种4-1在14.4ku上下时有一条蛋白质杂带。4株枯草芽孢菌的Ｔricine-SDS-PAGE电泳原理結果能够分析判断出其所产病菌素的分子质量均低于20ku。该结论也说明这种菌种生产病菌素很有可能为耐热性不错的II类小分子水蛋白质。

2.7 LC-MS/MS评定結果

表4为产病菌素枯草芽孢菌的LC-MS/MS评定結果。融合Ｔricine-SDS-PAGE电泳原理实验最后能够分析判断菌种O生产病菌素很有可能为13ku尺寸的带有DUF1093结构域的蛋白、13.506ku尺寸的YlbF大家族管控蛋白质及18.877ku的1型谷氨酰胺转移酶；菌种19造成的病菌素很有可能为8.969ku的假定蛋白质CXF51_07005、16.871ku尺寸的SPBc2原噬菌体衍化的蛋白YolA及其18.001ku尺寸的假定蛋白质BESＴ7613_2224；菌种F生产病菌素很有可能为分子质量尺寸为8.089ku的假定蛋白质C1Ｔ28_21195、13.011ku尺寸的溶解酶（加氧酶）、15.786ku尺寸的holin大家族蛋白及其分子质量为17.082ku的SMI1/KNR4大家族蛋白质；菌种4-1造成的病菌素很有可能相匹配为9.439ku的小分子质量的酸可溶胞子蛋白质Ｔlp或者分子质量为22.529ku的3-己酮糖-6-硫酸铵合酶。现阶段的结论与蛋白质数据库查询内已编码的蛋白质较为，沒有完全一致的蛋白质相符合，说明本分析中看到的病菌素不清除为新式病菌素的很有可能。病菌素进一步提纯，碳水化合物序列比对和产病菌素的病菌全基因组序列开展转录组测序剖析，进而精确分辨这4株枯草芽孢菌生产病菌素是不是为新式病菌素。

3 结果

本分析从福建省杜蛎中分离出来挑选出14株对普遍病原菌有抗菌活力的枯草芽孢菌菌种，根据抗菌实验发觉这种枯草芽孢菌对橙黄色链球菌、蜡样枯草芽孢菌、乳酸菌等革兰氏阳性菌及弗氏柠檬酸钠链球菌、副血溶弧菌、大肠埃希菌、肠胃沙门菌、志贺氏菌等革兰氏阳性菌阴性菌均有一定的杀菌作用。与此同时，这种枯草芽孢菌产的病菌素具备耐热性强、易被胰蛋白酶溶解和由核糖体编号生成造成病菌素等典型性病菌素特点。依据14株菌的抗菌谱范畴和rep-PCR結果，分析判断4种菌种很有可能有别于其他枯草芽孢菌。因而，选择这4株菌O（解木薯淀粉枯草芽孢菌），4-1（死谷枯草芽孢菌），19和F（枯草枯草芽孢菌）开展下一步实验。根据Ｔricine-SDSPAGE电泳原理实验，这4株枯草芽孢菌产的病菌素分子质量均不超20ku。表明以上4株病菌很有可能产II类乳酸菌饮料病菌素。运用LC-MS/MS评定并核对目前蛋白数据库查询，数据显示这4株枯草芽孢菌生产病菌素未在目前数据库查询中发觉，病菌素进一步提纯，碳水化合物序列比对和产病菌素的病菌全基因组序列开展转录组测序剖析仍需在未来实验中开展，进而精确明确这4株枯草芽孢菌的病菌素特性。