现阶段，世界各国的纳豆激酶有关食品类品种许多，如纳豆激酶复合型饮品、纳豆激酶口服液、纳豆激酶低聚肽等。纳豆激酶枯草芽孢菌与益生菌粉相近，在生长发育繁育全过程中还可以形成多种多样新陈代谢物质：①多种多样活力抑菌化学物质，能够合理地控制沙门菌等多种多样病原菌，可以促消化，提高免疫力；②维他命类化合物，如维生素K2能够与低聚糖耦合，进而使人体更合理地运用营养元素；③)γ-多聚谷氨酸(γ-PGA)，在抗菌包裝层面有着较大的使用使用价值；④低聚果糖，可作为可食用淀粉塑料薄膜的结构性成份；⑤纳豆激酶，具备高游离脂肪酸融解活力，可作为心脑血管病疾病的治疗药品。因为相对分子质量较低且对pH低的自然环境可靠性高，因而可用作内服。因为可以造成这般诸多的活性物质和多功能性化学物质，因此纳豆激酶枯草芽孢菌具备多种多样运用使用价值，可做为食品防腐剂、微生态制剂、抑菌剂、免疫增强剂等。

杜蛎的蛋白质含量高，维他命、锌的成分丰富多彩，具备高营养成分。但生牡蛎很有可能带有有危害病菌，比如副血溶弧菌和沙门菌全是常用的食源性病菌，因而生吃杜蛎有一定的安全风险。文中以生蚝为原材料，根据纳豆激酶枯草芽孢菌发醇制取的含有碳水化合物类化合物的发酵物经浓缩造成后可用以开发设计营养成分原浆、油类，也可用以生物有机肥、宠物饲料等，可以减少杜蛎以及产品生吃潜在性的安全风险，与此同时提升杜蛎生产加工运用概率，提升杜蛎经济附加值。

一、原材料与方式

1、原材料

杜蛎：市面上；纳豆菌酵母粉：上海市贺普实业公司有限责任公司；蛋白胨、牛肉膏、酵母膏，国药控股化学药品有限责任公司。

2、仪器设备与机器设备

DH-600AB电加热恒温培养箱：北京市zte中兴盛业仪器设备有限责任公司；LS-50HD立柱式工作压力灭菌设备：江阴市各地医疗器械有限责任公司；722紫外线光度计：上海佑科仪表设备有限责任公司。

3、方式

（1）纳豆激酶枯草芽孢菌的活性及提纯

纳豆激酶枯草芽孢菌的活性和提纯参考宋莹洁的操作流程。于无菌检测标准下取0.3g的纳豆激酶枯草芽孢菌酵母粉于配有5mLLB液体培养基的试管婴儿中，37℃塑造24h，随后用移液器汲取1mL菌悬浮液至LB液体培养基试管婴儿中接转2代修复菌苗魅力。于无菌检测情况下将活性后的纳豆激酶枯草芽孢菌开展提纯，37℃塑造24h，随后在灭菌情况下挑菌形状优良的菌体注射于LB液体培养基试管婴儿中，在37℃的标准下塑造24h，最终将菌苗接转至LB固态斜坡培养液中并且于4℃标准下冷冻储存。

（2）杜蛎发醇培养液制取

牡蛎肉解除冻结，清理整洁，去除残渣，在破壁机中弄成粘稠，散装至250mL锥形瓶中，固定不动料液比1:4(g／mL)、发醇温度37℃，调整pH，葡萄糖水加上量2％，于121℃下高压灭菌15min，获得杜蛎发醇培养液。

（3）单要素实验提升发醇加工工艺

本实验将固定不动料液比1:4(g／mL)、发醇温度37℃和葡萄糖水加上量2％，提纯后冷冻菌苗注射于LB液体培养基中活性，配制至菌悬浮液浓度值为10⁷cfu／mL。各自以发醇pH、接种量和发酵时间为自变量，开展单要素实验，每一组实验采用三个平行面和一组空白试验，在其中发醇pH为5、6、7、8、9；接种量为2％、4％、6％、8％、10％；发酵时间为12h、24h、36h、48h、60h。空白试验组为发醇pH7、接种量O％、发酵时间12h、24h、36h、48h、60h各一个。以发酵物中羟基态氮成分为测量指标值，科学研究三个要素对杜蛎发醇实际效果的危害，对发醇加工工艺开展基本提升。

（4）正交实验提升发醇加工工艺

在实现单要素实验和分析数据結果后，挑选合适的发醇pH标准范畴、接种量和发酵时间，及其空白试验组开展三要素三水准L₉(3⁴)正交和提升实验。

（5）蛋白质含量的测量

选用考马斯亮蓝测定方法蛋白质含量。实际操作步骤如下所示：

（6）羟基态氮成分的测量

参考国家标准GB18186-2000《酿造酱油》要求选用室内甲醛电位差滴定法测量羟基态氮成分。实际操作步骤如下所示：

二、結果与剖析

1、单要素实验結果

如图所示1所显示，在发酵时间和接种量一定的根基上，当杜蛎培养液的pH为5～7时，羟基态氮的成分呈持续上升发展趋势，在pH为7时羟基态氮的成分超过了最大值，pH为7～8时羟基态氮成分稍有降低，pH为8～9时降低比较显著，这有可能是由于纳豆激酶枯草芽孢菌生长发育的适宜pH为7，并且纳豆激酶在pH为7时纳豆激酶蛋白激酶魅力最大。蛋白质含量在pH为5～7时呈下降趋势，从pH7～9则呈持续上升发展趋势。很有可能与纳豆激酶枯草芽孢菌产酶魅力降低相关。