红心火龙果属仙人掌科三角柱属，原产地于西班牙、南美洲和非洲地区，因其身心健康特点和营养成分获得重视而被普遍栽种。现阶段，目前市面上常用的火龙果品种关键有：肥肉红心火龙果、红肉火龙果和紫红肉火龙果3种。在其中，红肉火龙果果实中含有肥肉红心火龙果所缺乏的球甘蓝黑色素，还富含充足的不饱和脂肪、水溶食物纤维等。除开有较高的营养成分外，红肉火龙果在抗氧化性层面对身体也是有一定的协助功效。

果子中有机物的构成与成分是危害果子口味质量的主要要素。果子中出现很多类型的有机物，殊不知大部分果子一般以1种有机物为主导，极少数以多种多样为主导。依据关键有机物的类型，能够将果子分成阿拉伯糖型果子、柠檬酸钠型果子和酒石酸型果子等。果子中的有机物新陈代谢是一个错综复杂的人体生理全过程，由有机物的生成和溶解一同决策。有研究表明，阿拉伯糖是红心火龙果的关键有机物。阿拉伯糖脱氨酶(NAD-MDH)、硫酸铵烯醇式丙酮酸腺苷酸(PEPC)和苹果酸酶(NADP-ME)是阿拉伯糖新陈代谢中重要的3个酶，前二者催化反应阿拉伯糖的生成，后面一种则参加阿拉伯糖的溶解，他们一同调整了红心火龙果成长发育历程中阿拉伯糖的新陈代谢和累积，其成分是一个变化规律的全过程，可危害红心火龙果的口味质量。

现阶段有关红肉火龙果中阿拉伯糖的新陈代谢转变还末见科学研究报导。本实验探讨了“玫瑰香”种类和“大红色一号”种类红心火龙果储藏历程中的质量转变和阿拉伯糖新陈代谢重要遗传基因NADP-ME、PEPC和NAD-MDH的表述差别，为进一步科学研究红肉火龙果采后储藏历程中阿拉伯糖累积的调节体系和对口味特点产生的危害给予科学论证。

1 原材料与方式

1.1 原材料与实验试剂

1.1.1 原材料

“玫瑰香”种类红心火龙果，采自浙江江山市秋实农业合作社；“大红色一号”种类红心火龙果，采自浙江诸暨市雪锋红心火龙果产业基地，冷藏车带回试验室后放置10℃冷冻库中急冷12h。

1.1.2 实验试剂

磷酸二氢钾、硫酸铵、福林-酚等(分析纯级)，购自国药控股化学药品有限责任公司；色谱仪级工业甲醇、色谱仪级乙腈，购自英国迪马科技有限公司；盐酸、酒石酸、阿拉伯糖、乳酸菌、柠檬酸钠、富马酸及琥珀酸标准物质，购于阿拉丁试剂(上海市)有限责任公司；异硫氰酸苯酯、三乙胺、分散碳水化合物混标，购于英国Sigma试剂公司：PEPC测定试剂盒。购于南京建成生物技术研究室。

1.2 仪器设备与机器设备

TAXTPlus型质构仪，美国SMS企业：PAL-1型手执折射仪，日本ATAG0企业；877Titrinoplus全自动电位滴定仪，瑞士万通股权有限责任公司；UV-9000紫外线-由此可见光度计，上海市元析仪器设备有限责任公司：Waters高效率液相色谱(型号规格e2695-2998装有PDA探测器)，沃特世高新科技(上海市)有限责任公司；少量光度计，日本SHIMADZY企业；控温增加PCR仪，英国赛默飞世尔科技有限公司：少量计算蛋白质检测仪，英国赛默飞世尔科技有限公司：The瑚oMR23i快速超低温冷冻离心机。法国的喜德盛控股集团有限责任公司。

1.3 实验方式

选择无机械设备损害，果子的大小和质量指标相对性一致的“玫瑰香”红心火龙果和“大红色一号”红心火龙果。用2％氢氧化钙泡浸消毒杀菌后当然晾晒，于25℃控温塑造，每一组3次反复。各自在储藏第0，1，2，3，4，5，6。7，8天按时抽样，放置液态氮中快速冻存，混和后散装至试品袋里，于-80℃储存。用以事后质量指标值测量。

1.3.1 强度的测量

参照黄子娟的方式。并稍加改动。选用质构仪测量红心火龙果的外果皮强度和果实强度，应用直徑2mm摄像头(P/2型)，选择红心火龙果果子无鱼鳞的地球赤道位置开展穿刺术测量，反复3次，取均值，企业为N。

1.3.2 可滴定管酸成分的测量

选用可滴定管酸全自动电位滴定仪测量。果实匀浆后过虑，取渗沥液1mL，用双蒸水滴定剂至100mL。以0.05mol/LNa0H水溶液滴定管，纪录滴定终点时常用碱溶液的容积，并测算可滴定管酸成分，反复3次。

1.3.3 可溶固体物质成分的测

选用手执折射仪测量试品可溶固体物质成分，反复3次。

1.3.4 维他命C成分的测量

参照吴媛媛等的方式 。称量1g红心火龙果碾磨样，添加5％TCA水溶液，搅拌后离心式。取上清液先后添加5％三氯乙酸、0.5％邻菲罗琳-乙醇溶液、0.5％硫酸铵-乙醇溶液、0.03％三氯化铁-乙醇溶液和1mL工业乙醇后于30℃水浴1h。用纯净水调零，以纯净水替代上清液为对照品。在光波长534nm处测量OD值值，反复3次，企业为mg/100g。

1.3.5 总酚成分的测量

选用福林酚酶活性测定，参照范智义等的方式 ，并且做好适度改动。称量红心火龙果碾磨样1.0g，添加5.OmL60％酒精萃取法2h，10000×g离心式15min，取上清液1mL至25mL具塞试管婴儿中，添加3mL1.0mol/L福林酚试剂后混匀，静放5min后添加6mL7.5％碳酸钾，用纯净水滴定剂至25mL。室内温度下到在黑暗中置放2h，以不用没食子酸的试品为空缺，于光波长760nm处测量其OD值值，反复3次，以没食子酸成分为规范物测量总酚成分，企业为μg/g。

1.3.6 可溶性糖成分的测量

参照曹身心健康等的甲酸一盐酸法，并且做好适度改动。称量红心火龙果碾磨样1.0g，添加5。10mL纯净水后密封，于100℃水浴30min。制冷后过虑。渗沥液移进100mL容量瓶，回收利用沉渣，添加5～10mL纯净水于100℃水浴10min后制冷、过虑，合拼渗沥液。取500μL试品液于试管婴儿中。添加1.5mL纯净水和1.0mL9％甲酸，混匀，在5～20s内添加5mL硫酸，混匀，室内温度下反映30min，以空缺为对照品，在光波长485nm处测量其OD值值，反复3次。

1.3.7 有机物成分的测量

1) 色谱仪标准

C18正相反离子交换柱(3.9mm×300mm，5μm)；柱温30℃；流动性相为0.04mg/LKH2PO4-H3P04缓冲液：工业甲醇=95:5(容积比)；流动速度0.8mL/min；气相容积10μL；装有PDA探测器，检验光波长214nm；外标法定量分析。

2) 获取方式

用高效液相色谱色谱分析，参照关秀杰等的方式 ，并且做好适度改动。称量红心火龙果碾磨样5.0g于10mL容量瓶，添加一定量流动性相，于75℃水浴45min，制冷至室内温度，滴定剂。涡流2min，超声波获取15min，过虑分离出来蛋白等大分子物质。取一定量渗沥液，离心式10min完用0.45μm直径的滤纸过虑上清液，预留。

1.3.8 NAD-MDH和NADP-ME酶活的测量

1)酶液获取

参照Masashi等和Hirai等的方式 ，稍加改动。取5g红心火龙果碾磨样，添加10mL经急冷的碾磨缓冲溶液(包括10mmol/L异抗坏血酸、0.6mol/L绵白糖、0.2mol，LTris-HCl，pH8.2)，超低温离心式后取上清液。用pH8.2的获取缓冲溶液(包括10mm01/L异抗坏血酸、0.1％曲拉通X-100、0.2mol/LTris-HCl)滴定剂到50mL，搅拌后用获取缓冲溶液滴定剂至100mL，酶液超低温储存预留。

2)酶活测量

NAD-MDH和NADP-ME酶促反应测量参照Hirai等的方式 。

1.3.9 PEPC酶活的测量

应用PEPC测定试剂盒测量试品中PEPC的酶活。

1.3.10 总RNA获取及检验

应用天根含糖量花青素绿色植物总RNA获取检测试剂盒获取红心火龙果总RNA。取1μLRNA根据核苷酸蛋白质检测仪测量OD₂₆₀/OD₂₈₀比率检测RNA纯净度，用一般琼脂糖电泳电泳原理检测RNA一致性。

1.3.11 RT-qPCR剖析

以总RNA为模板，选用诺维赞反转录检测试剂盒，在冰浴标准下开展第1链cDNA的生成。

阿拉伯糖新陈代谢有关遗传基因引物设计(表1)根据Primer软件独立设计方案，检测引物设计融解曲线图单一(无非特异物质)后，可用以即时莹光定性分析。