目地

创建铠甲草中黄酮类物质和齐墩果酸的含水量测定法。

方式

选用HPC测定方法铠甲草中齐墩果酸的成分。WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm），流动性相为工业甲醇-PBS（85∶15），流动速度1.0mL/min，柱温35℃，气相量为10μL，检验光波长210nm，测量齐墩果酸的成分。結果：齐墩果酸在5～50μg/mL的浓度值范内呈优良线性相关（Y=4533X 909.6，R=0.9996），均值利用率为99.39%，RSD为1.53%（n=6）。

结果

本实验方法精确灵巧、平稳靠谱，可用以铠甲草中齐墩果酸的含水量测量。

铠甲草（CassiamimosoidesLinn.）为豆科植物（Leguminousae）决明属一年或多年生长亚灌木状木本植物，以狼把草当药，关键分散于广东省、福建省、云南省、中国台湾、贵州省和广西省等地，其味甘、性温，具备清热去火、化淤化积的作用。有科研结果显示，铠甲草可以有效的抑止淀粉酶，避免轻度脂肪肝；其首要成分有黄酮类物质、齐墩果酸、β-谷甾醇、木犀草素、原儿茶醛等。殊不知，现阶段世界各国对铠甲草的分析主要是聚集在成分和药用价值层面，相关铠甲草中药材质量管理的探究非常少，且末见对其相关成分开展成分检测的报导。本试验以铠甲草中具备抗感染护肝的相关成分齐墩果酸，做为定量分析检验指标值成份，创建铠甲草中齐墩果酸的HPLC成分测定法，为铠甲草的质量管理和有效开发设计给予参照根据。

1仪器设备与原材料

WatersAlliance2695型高效率液相色谱；WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm）；WJX-A1000型快速多用途破碎机；JP-100S型超声波清洗器；MING-CHE24UV超纯水机。

齐墩果酸标准品（C1723001）；铠甲草采于广东梅州市蕉岭县，经嘉应学院医科院生药学翟明教师评定为豆科植物决明属绿色植物铠甲草（Cassiamimosoides）的狼把草；别的实验试剂均为分析纯。

2方式及結果

2.1标准品水溶液的制取

高精密称量齐墩果酸标准品1mg，放置10mL容量瓶中，加工业甲醇至标尺，即得。

2.2供试品水溶液的制取

称量铠甲草细粉2g，添加2moL/L的硫酸10mL，充足浸泡后，在60℃水浴下，酸水解反应2h，沉淀用超纯水系统水清洗至中性化，干躁后添加10倍量的90%的乙醇溶液和0.5%NaOH水溶液，调整pH值至8，50℃超声波30min，旋蒸后，水浴加热浓缩成中药浸膏。

中药浸膏用工业甲醇超声波融解后，离心式取上清液，滴定剂至10mL，即得。

2.3色谱仪标准

离子交换柱：WatersXBridgePeptideBEHC18（4.6mm×250mm，5μm）；流动性相：工业甲醇：PBS=85∶15；检验光波长：210nm；流动速度：1.0mL/min；进样量：10μL，柱温：35℃。

2.4线性相关调查

各自高精密汲取“2.1”项下的齐墩果酸标准品0.5、1、2、3、4、5mL水溶液于10mL容量瓶中，用工业甲醇滴定剂，得浓度值为5、10、20、30、40、50μg/mL系列产品浓度值的齐墩果酸标准品水溶液，于“2.3”项下的色谱仪标准，以齐墩果酸标准品水溶液色谱仪峰总面积Y为纵轴，齐墩果酸标准品浓度值X（μg/mL）为横坐标轴，开展线性拟合，得齐墩果酸标曲，求取线性回归方程Y=4533X 909.6，R=0.9996。结果显示，在5～50μg/mL的含量范畴内，齐墩果酸标准品水溶液的峰总面积与浓度值的线性相关优良。

2.5专属性调查

取新项目“2.1”和“2.2”项所制取的标准品水溶液和供试品水溶液，在“2.3”的色谱仪标准下气相，齐墩果酸的保存期约为13.77min，峰型平稳，分离度优良，有不错的基准线分离出来，末见残渣峰影响，具备优良的专属性。如图所示1所显示。

2.6仪器设备精度实验

高精密汲取标准品水溶液1.0mL，于“2.3”项的色谱仪标准下，持续反复气相6次，每一次10μL，检验获得黄酮类物质峰总面积的RSD为1.36%，说明仪器设备精度优良。

2.7可靠性实验

高精密汲取供试品水溶液1.0mL，各自于0、2、4、6、8、12h于“2.3”项色谱仪标准下气相，检验获得齐墩果酸的峰总面积的RSD为0.82%。说明供试品水溶液在12h内平稳。

2.8可重复性实验

高精密称量6份等品质铠甲草细粉2.00g，按“2.2”项下的方式平行面制取6份供试品水溶液，于“2.3”项的色谱仪标准，检验获得齐墩果酸峰总面积的RSD为1.47%。说明该方式可重复性优良。

2.9加样利用率实验

高精密称量已经知道成分的等品质铠甲草细粉6份，每一份2.00g，各自高精密添加同一浓度值的齐墩果酸标准品，按以上“2.2”的获取方式平行面制取成供样品水溶液，于“2.3”项色谱仪标准下测量，测算获得均值利用率結果为99.39%，RSD为1.53%。说明该方式测定的效果有优良精确性。結果见表1。

2.10试品的含量测量

高精密称量3份不一样批中药材各2.00g，依照“2.2”项的配制方式制取成供样品水溶液，每一份试品各自在“2.3”项的色谱仪标准下气相三次，纪录峰总面积，测算试品中齐墩果酸的成分。結果见表2。

3探讨

在调查齐墩果酸的色谱仪标准时，曾选用工业甲醇水，工业甲醇-0.1%苯甲酸和工业甲醇-PBS做为流动性相，调查数据显示，当流动性相挑选为工业甲醇-PBS（85∶15）时，试品中齐墩果酸分离度更强，峰型平稳，无杂峰影响。因为齐墩果酸与此同时带有甲基和羧基官能团，在偏碱情况下容易被获取，在获取标准的调查全过程中，发觉添加适量碱溶液使其pH值至8时，更有利于齐墩果酸成份的获取。

本研究创建运用高效液相色谱色谱分析测量铠甲草中齐墩果酸成分的方式 ，方式精度高、可靠性、可重复性、加样利用率均合乎方法学认证的规定。测出3批试品中，齐墩果酸的占比在3.67%～3.73%中间，成分较高，且齐墩果酸在临床医学上关键用以养肝降酶，与铠甲草的作用相符合，表明齐墩果酸合适做为铠甲草的质量检验指标值成份，该办法可做为铠甲草质量管理的方式 ，进而为铠甲草产品质量标准的制定给予参照根据。